毕业论文：《农杆菌介导棉花转基因的方法》.docVIP

河南大学2012届本科毕业论文 农杆菌介导棉花转基因的方法 论文作者姓名： 作 者 学 号：0803632010 所 在 学 院：河南大学民生学院 所 学 专 业：生物技术 导师姓名职称： 教授 论文完成时间：2012年5月7日 2011年5月10日 目录 TOC \o 1-3 \h \z \u \l _Toc324585641 摘要 4 \l _Toc324585642 1 前言 4 \l _Toc324585643 1.1植物转基因的意义 4 \l _Toc324585644 1.2棉花转基因常用的方法 h 4 \l _Toc324585645 1.2.1基因枪法 5 \l _Toc324585646 1.2.2 PEG法 5 \l _Toc324585647 1.2.3显微注射法、电击法及激光法 5 \l _Toc324585648 1.2.4花粉管通道法 6 \l _Toc324585649 1.2.5农杆菌介导法 6 \l _Toc324585650 1.3植物耐盐相关的SOS2 基因 9 \l _Toc324585651 1.3.1SOS2 基因的定位克隆 9 \l _Toc324585652 1.3.2SOS2 编码一个假定的丝氨酸/ 苏氨酸蛋白激酶 h 9 \l _Toc324585653 1.4农杆菌介导棉花的作用 10 \l _Toc324585654 2 供试材料 h 10 \l _Toc324585655 2.1棉花的胚性愈伤 h 10 \l _Toc324585656 2.2介导菌种 h 10 \l _Toc324585657 3 方法与结果 h 10 \l _Toc324585658 3.1实验方法 h 10 \l _Toc324585659 3.1.1平板划线 h 10 \l _Toc324585660 3.1.2菌落PCR鉴定 h 11 \l _Toc324585661 3.1.3小摇 h 12 \l _Toc324585662 3.1.4大摇 h 12 \l _Toc324585663 3.1.5集菌 12 \l _Toc324585664 3.1.6重悬 h 13 \l _Toc324585665 3.1.7农杆菌侵染与共培养 h 13 \l _Toc324585666 3.1.8抗性愈伤筛选 h 14 \l _Toc324585667 3.2抗性愈伤组织的鉴定（结果） h 14 \l _Toc324585668 3.2.1愈伤组织DNA的提取 14 \l _Toc324585669 3.2.2扩PCR与电泳分析 h 15 \l _Toc324585670 4 农杆菌介导的讨论 15 \l _Toc324585671 4.1植物受体因子与农杆菌间的作用机理 15 \l _Toc324585672 4.2农杆菌菌株和质粒要求 h 16 \l _Toc324585673 4.3 Ti载体容量 16 \l _Toc324585674 5 结束语 16 \l _Toc324585674 参考文献 17 Abstract \l _Toc324585674 19 \l _Toc324585674 致谢信 20 农杆菌介导棉花转基因的方法 左耳东 （河南大学民生学院 2008级生物技术专业 开封 475004） 摘要：SOS2 基因编码一个446氨基酸的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。研究发现，拟南芥受盐胁迫时，质膜上钠氢转运蛋白SCaBP8蛋白的活性增强，受了SOS2磷酸化的调节，增加植株耐盐性。本文通过GV3101农杆菌介导的转化方法，将SOS2基因转入棉花茎尖愈伤组织，繁育成苗，获得转基因棉花，以期熟练掌握农杆菌介导SOS2基因转入棉花愈伤组织的方法。结果显示，通过农杆菌介导得到的抗性愈伤组织，经过提取DNA、PCR扩增、电泳分析，确定得到具有耐盐性基因的棉花愈伤组织，成功运用了农杆菌介导SOS2基因转入棉花愈伤组织。 关键词：棉花转基因 农杆菌介导转化 愈伤组织 SOS2基因 1前言 1.1植物转基因的意义 自从1984年首次获得转基因烟草[1]以来, 植物转基因技术日益得到广泛的应用, 它对于分子遗传学研究和植物改良都具有特别重要的意义。在基础研究上, 对于植物基因的表达与调控、分子元件的鉴定与利用[2]等, 植物基因转化技术无疑是一个有利的研究工具在改良农艺性状上, 它可以大大缩短育种年限, 加快育种进程[3,4];更为重要的是,植物基因转化打破了物种间基因交流的界限, 目的基因的来源极为广泛, 不仅可以来自