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真核微生物观察及筛选实验报告 　　实验报告　　实验一《显微镜的使用与微生物形态观察》　　一、实验目的：1、学习并掌握油镜的原理和使用方法　　2、观察各种细菌的形态，并学会绘图　　二、实验原理：1、油镜的工作原理：普通光学显微镜的物镜通常有低倍物镜、高倍物镜、和油镜三种、　　2、基本原理：用油镜观察标本、是在使用高倍镜的基础上，采用同玻璃折射光相似的油状物，滴加在标本与油镜中间，以避免光线散射，提高显微镜的清晰度和分辨能力。是观察物象更加清楚明了。　　三、实验器材：　　1、菌种：细菌三型图片、酵母菌涂片、青霉菌涂片、大肠杆菌等。　　2、溶液或试剂：香柏油、少量乙醚和无水乙醇的混合液　　3、仪器：普通光学显微镜、檫镜纸等。　　四、操作步骤：1、观察前的准备　　2、低倍镜观察　　3、高倍镜观察　　4、油镜观察　　五、绘图　　1大肠杆菌：　　2、葡萄球菌：　　3、青霉菌　　北方民族大学　　学生实验报告　　院生物科学与工程学院姓名学号　　专业生物工程班级　　同组人员　　课程名称微生物学类实验实验名称产酶微生物的分离、纯化与选育实验日期批阅日期成绩教师签字　　北方民族大学教务处制　　产酶微生物的分离、纯化与选育　　实验意义：　　酶是生物体内进行生物化学反应的催化剂，在生物体中已发现的酶有2500多种。由于酶促反应的特异性强，反应温和，安全无毒，环境污染少，在洗涤剂、皮革、纺织、诊断、制药等领域具有广泛的应用价值。能由工业生产的50多种酶制剂蛋白酶、淀粉酶等，大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌生产的。通过本实验，学会从自然界中分离产酶微生物的方法，军中的纯化技术及其高产菌的选育技术。　　1.蛋白酶产生菌的分离与纯化　　实验目的：学习从自然界中分离蛋白酶产生菌并纯化。　　实验原理　　许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌。本实验将土壤样品悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到酪蛋白平板进行培养，根据酪蛋白平板的水解圈作初筛。也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养，分离筛选其他蛋白酶产生菌。　　实验仪器与材料　　土壤样品或其他富含蛋白质的样品、牛肉膏蛋白胨培养基平板、酪蛋白平板、无菌水、芽孢染色液；显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒等。　　实验方法与步骤　　配制酪素培养基：牛肉膏、NaCl，酪素，琼脂，蒸馏水100mL左右，调节pH。　　配制方法：称取酪素1g，先用少量2%NaOH润湿，玻璃棒搅动，再加适量的蒸馏水，在沸水浴中加热并搅拌，至完全溶解，补足水量至100mL，加入其他成分，调整pH值，灭菌备用。　　配制土壤样品：　　1）采集土壤样品，用无菌水制备1：10土壤悬液。　　2）取1：10土壤悬液5ml，然后将悬液按10、10、10、10梯度稀释，注入试管中。-1-2-3-4　　3）将这些试管放入75-80℃水浴中热处理10min，以杀死非芽孢细菌。　　灭菌与接种：　　1）将培养基灭菌处理。　　2）取加热处理过的土壤悬液100-200μL，涂布接种到酪素培养基平板，将平板倒置，于30-32℃培养24-48h。　　蛋白酶产生菌的纯化：　　1）根据酪蛋白平板的水解圈作初筛，挑选出单菌落的蛋白酶产生菌。　　2）将挑选出的单菌落用平板划线法接种到牛肉膏蛋白胨培养基上，然后将平板倒置放于培养箱中24—48h。　　芽孢杆菌的染色判断　　1）挑去菌落涂片固定。　　2）滴加1——2滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。　　3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液　　4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。　　5）用番红水溶液复染1分钟，水洗至水为无色。　　6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。　　蛋白酶产生菌的保存培养：　　1）用斜面划线法，取纯化鉴定后的菌种接种于斜面上，放于培养箱中24—48h。　　2）将培养后的菌种置于冰箱中保存。　　实验结果：　　在含酪蛋白的平板上，产蛋白酶的芽孢杆菌可形成蛋白质水解圈。自然界中分离的微生物各菌株间产蛋白酶活力有很大差异，有些芽孢杆菌酶活力超过4000U/mL。　　1）描述你所分离的蛋白酶产生菌的菌落特征和个体形态特征；　　答：第一组：A:原液培养基表面出现大面积菌落，难以挑出所需单一菌落；　　B:10培养基表面菌落较多，但未发现与所需菌落相关特征；　　C:10培养基表面基本未出现菌落：　　D:10、10均发现与所需菌落特征相符的菌落，继续培养待进一步纯化。第二组：A：原液培养基表面出现大面积菌落，难以区分-2-