枯草芽胞杆菌TR21的发酵和海洋细菌DM09的抗真菌活性物质研究-微生物学专业毕业论文.docxVIP

lIII lIII I I II I III I I I IIII IIl 、t 1 805243 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是否必威体育官网网址 孬 如需必威体育官网网址，解密时间 年 月 曰 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 入已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构 的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研究生签名：渺蔷明 时间：凇匆年多月∥ 同 学位论文使用授权书 学化论 虢矽锏翮掀材 签名门期：2。，。年勿乡同 签名同期：圳9年‘月乡同 枯草芽胞杆菌TR2 枯草芽胞杆菌TR2 1的发酵和海洋细菌DM09抗真菌活性物质研究 目录 摘要 ．．I ABSTRACT ．III 第一部分抗香蕉枯萎病4号小种枯草芽胞杆菌TR21的发酵条件优化及田间防效测 j皂 ．．1 1‘前言日U吾 ．．1．．1 1．1香蕉枯萎病危害概况 ．1 1．2国内外香蕉枯萎病生物防治概况 2 1．3培养基配方优化方法概况 4 2材料和方法 6 2．1实验材料 一6 2．1．1菌株和培养基 6 2．1．2实验仪器 6 2．2实验方法 7 2．2．1 TR21的形态学观察 ．．7 2．2．2 TR2l的活化 7 2．2．3碳源筛选实验 。7 2．2．4氮源筛选实验 7 2．2．5无机盐筛选实验 7 2．2．6田口稳健设计方法优化TR21的发酵培养基 8 2．2．7枯草芽胞杆菌TR21对香蕉枯萎病的田间防效测定 9 3结果和分析 ．10 3．1 TR21的形态学观察 ．．10 3．2碳源筛选结果 。1l 3．3氮源筛选结果 ．．1 2 3．4无机盐筛选实验 ．．1 3 3．5田口设计优化TR2 1的发酵培养基 l 3 3．5．1田口设计实验和结果 13 华中农业大学2010届硕士研究生学位论文3．5．2信噪比和均值方差分析 华中农业大学2010届硕士研究生学位论文 3．5．2信噪比和均值方差分析 ．．1 5 3．5．3参数主效应图 ．．17 3．5．4优化结果 18 3．6 TR21防治巴西蕉枯萎病的田间试验 一18 4讨论 ．20 第二部分抗油菜核盘菌海洋细菌的快速分子鉴定和抗菌活性物质研究 一2l l前言1日U舌 ．2—1‘． 1．1油菜核盘菌危害及生物防治概况 21 1．2海洋细菌活性物质研究概况 22 1．3解淀粉芽胞杆菌生物防治研究概况 24 2材料和方法 ．26 2．1实验材料 26 2．1．1供试菌株 ．26 2．1．2实验药品 ．26 2．1．3培养基 ．．26 2．1．4实验仪器 ．27 2．2实验方法 。27 2．2．1菌株DM09的16S rDNA序列扩增 ．27 2．2．2菌株DM09的gyrB基因序列扩增 29 2．2．3序列的系统发育进化分析 ．29 2．2．4活性物质特性研究 ．29 2．2．4．1活性物质分子量大小确定 29 2．2．4．2酸沉淀实验 29 2．2．4．3甲醇对X．Ol菌株拮抗物质聚集特性的影响 ．．29 2．2．5脂肽的分离纯化和结构鉴定 ．30 2．2．5．1酸沉淀 30 2．2．5．2 50 kD两步超滤 ．．30 2．2．5．3固相萃取 ．30 2．2．5．4高效液相色谱分离 30 枯草芽胞杆菌TR21的发酵和海洋细菌DM09抗真菌活性物质研究2．2．5．5电喷雾质谱鉴定脂肽结构 枯草芽胞杆菌TR21的发酵和海洋细菌DM09抗真菌活性物质研究 2．2．5．5电喷雾质谱鉴定脂肽结构 30 3结果和分析 3 l 3．1 16S rDNA和gyrB基因序列的克隆 31 3．2基于16S rDNA基因的BLAST结果 32 3．3基于gyrB基因Blast结果的系统进化分析 ．．33 3．4活性物质特性研究 ．．33 3．4．1活性物质分子量大小确定 ．33 3．4．2酸沉淀实验 34 3．4．3甲醇对活性物质聚集特性影响 34 3．5脂肽分离纯化和结构鉴定 ．： ．34 3．5．1固相萃取 j 。34 3．5．2高效液相色谱 。35 3．5．3电喷雾质谱鉴定脂肽结构 ．36 4讨论 39 参考文献 41 致谢 48 枯草芽胞杆菌TR21的发酵和海洋细菌DM09抗真菌活性物质研究摘要 枯草芽胞杆菌TR21的发酵和海洋细菌DM09抗真菌活性物质研究 摘要 本论文共包括两部分工作：一部分是对抗香蕉枯萎病4号小种的枯草芽胞杆菌 TR21进行了发酵条件优化及田间防效的测定；另一部分是对分离自深海的广谱抗真 菌芽胞杆菌进行了快速分子鉴定，并对