马勃菌液体发酵条件的优化及及其药效成分初步筛选研究-药学;微生物与生化药学专业毕业论文.docxVIP

摘要 摘要 I I 摘 要 马勃(puffball)为常用真菌类中药，其基源主要为大秃马勃 Calvatia gigantea、 脱皮马勃 Lasiosphaera fenzlii 和紫色马勃 Calvatia lilacina (Mont.et Berk) Lloyd 的 干燥子实体。马勃的人工栽培尚处于起步阶段，液体发酵菌丝具有培养周期短、 产品质量稳定、便于工业化生产等优点，且发酵液和子实体一样也有抑菌、抗炎 等药理作用。因此，利用液体发酵技术进行马勃的生产一个重要的经济价值。 本研究以大秃马勃 Calvatia gigantea 和脱皮马勃 Lasiosphaera fenzlii 为研究 材料，进行了马勃孢子的萌发条件研究，并以大秃马勃 Calvatia gigantea 菌种为 研究材料，进行了优化培养和发酵液药理实验的初步研究，结果如下： 采用 DNA 分子鉴定技术对采集的样品进行了分子鉴定，结果为大秃马勃 Calvatia gigantea 和脱皮马勃 Lasiosphaera fenzlii。利用 rDNA ITS 序列进行分析 并建构系统发育树，结果表明了脱皮马勃 Lasiosphaera fenzlii 和大秃马勃 Calvatia gigantea 的亲缘关系较近，根据分子系统发育进化树可将其归属伞菌亚纲、伞菌 目。 对大秃马勃 Calvatia gigantea 和脱皮马勃 Lasiosphaera fenzlii 的孢子萌发进 行了不同温度、不同营养物及浓度和光照等条件对其孢子萌发影响的研究。结果 表明，25℃是马勃孢子萌发的适宜温度；2%的葡萄糖和 Bonar 液可促进孢子萌 发，而氯化钠则对孢子萌发有抑制作用；光照或黑暗对孢子萌发无影响；来源于 两个不同年份的孢子的萌发率差异不显著。 研究了不同培养基、不同培养条件对大秃马勃 Calvatia gigantea 菌丝体生长 的影响。结果表明：综合 PDA 培养基为大秃马勃 Calvatia gigantea 的最佳培养 基，并在此基础筛选到麦芽糖为最佳碳源。最适菌丝体生长的条件为：培养温度 为 26℃、pH 值为 6.0。 利用 L9(3)3 正交试验筛选出了大秃马勃 Calvatia gigantea 液体深层发酵的优 化培养基。结果表明：最佳碳源和氮源分别为蔗糖、马铃薯和黄豆粉，最佳的水 平组合为蔗糖 20g/L、马铃薯粉 300g/L、黄豆粉 30g/L；得到的最佳培养条件为 6d 的种龄，10%的接种量、100mL/250mL 的装液量，初始 pH6.0，28℃培养温 度，180r/min 的摇床转速，培养时间为 12d。 大秃马勃 Calvatia gigantea 发酵液的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇提取物进行 二甲苯诱导小鼠耳廓急性炎症和醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性实验，结果表 明大秃马勃 Calvatia gigantea 发酵液石油醚提取物处理组、乙酸乙酯提取物处理 组对二甲苯诱导小鼠耳肿胀具有明显的抑制作用；大秃马勃 Calvatia gigantea 发 酵液乙酸乙酯提取物处理组、正丁醇提取物处理组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管 II II 通透性具有明显的抑制作用。在抑菌试验中，大秃马勃 Calvatia gigantea 发酵液 的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇的萃取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠 杆菌有明显的抑制作用。 关键词：马勃，孢子萌发，液体发酵，抗炎 ABSTRACT ABSTRACT PAGE PAGE IV Abstract Puffball fungi is a popular Chinese medicine,for its base mainly for Calvatia gigantea,Lasiosphaera fenzlii and Calvatia lilacina,which were dry fruitbody.Puffball aritifical cultivation is still in the initial stage, liquid fermentation has merits with short cycle,quality stability,ease of industrial production,and so on.The broth same as fruiting body,also has antibacterial,anti-inflammatory and other pharmacological effects.Therefore,the use of liquid fermentation technology for the puffball