食品中微生物之检验方法mdash;星狀病毒之检验草案.pdfVIP

102 年 7月 30日部授食字第 1021900856號預告訂定 食品中微生物之檢驗方法 —星狀病毒之檢驗 草案( ) Methods of Test for Food Microorganisms- Test of Astrovirus 1. 適用範圍：本方法適用於貝類及飲用水中星狀病毒之檢驗。 2. 檢驗方法：檢體經 RNA 萃取後，以反轉錄聚合酶鏈反應(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)之方法。 2.1. 工作環境：工作平台須寬敞、潔淨、光線良好。檢體前處理、RT- PCR試劑配製及 PCR 等檢驗過程皆需有區隔空間，避免 交叉汙染。 註 2.2. 裝置( 1) 2.2.1. 生物安全操作櫃(Biological safety cabinet, BSC) ：第二等級 (class II)(含 ) 以上者。 2.2.2. 高壓滅菌釜。 2.2.3. 冰箱：能維持 5±3℃。 2.2.4. 均質機(Homogenizer) 。 2.2.5. 天平：最大稱重量為2000 g者，靈敏度為 0.1 g ；最大稱重量為 120 g者，靈敏度為 1 mg 。 2.2.6. 振盪器。 2.2.7.酸鹼度測定儀 (pH meter) 。 2.2.8. 紫外燈箱：具波長312 nm 、365 nm 紫外燈。 2.2.9. 微波爐或加熱板 (Hot plate) 。 2.2.10.聚合酶鏈反應器： GeneAmp® PCR System 9700 ，或同級品。 2.2.11. 電泳槽：供 DNA電泳用。 2.2.12.加熱振盪器：具 55℃溫控及振盪功能，且能維持內部溫度溫差 0.5℃以內者。 2.2.13. 微量冷凍離心機 (Microrefrigerated centrifuge) ：可供各式離心管離 心使用，可達 20000 × g 以上，並具4℃溫控功能。 2.2.14. 旋渦混合器(Vortex mixer) 。 2.2.15. 抽氣幫浦。 2.2.16.玻璃過濾器組：直徑為 47 mm 且可滅菌者。 註 1 ：本方法所使用或提及之產品品牌不代表為同類產品中最好者；反 之，未使用或未提及之產品品牌亦不代表為同類產品中較差者。 2.3. 試藥 2.3.1. 病毒萃取用：氯化鈉、氫氧化鈉、硼酸、無水磷酸氫二鈉 1 102 年 7月 30日部授食字第 1021900856號預告訂定 (Na HPO ) 、磷酸二氫鉀(KH PO ) 、聚乙二醇 6000 (polyethylene 2 4 2 4 glycol 6000, PEG 6000) 、氯仿、丁醇、硫酸、鹽酸、氯化鎂 (MgCl ．6H O) 、乙二胺四乙酸二鈉(ethylenediaminetetraacetic acid 2 2 disodium salt, Na2-EDTA) 及 三 羥 甲 基 胺 基 甲 烷 (tris(hydroxymethyl)aminomethane, Tris-base)均採用試藥特級。 2.3.2. 病毒 RNA抽取用：適用於病毒 RNA抽取之市售套組。 2.3.3. 病毒 RNA處理用：去氧核醣核酸水解酶 I (DN