反相液相色谱法分离芳香烃实验报告.docxVIP

反相液相色谱法分离芳香烃实验报告 　　实验八高效液相色谱法分离芳香烃　　一、实验目的　　1、了解高效液相色谱法的原理。　　2、学习高效液相色谱的操作方法。　　3、掌握高效液相色谱法分离芳香烃的一般步骤及过程。　　二、实验原理　　色谱法是利用不同物质在固定相和流动相中具有不同的分配系数，当两相作相对移动时，使这些物质在两相间进行反复多次分配，使原来微小的分配差异产生了很明显的分离效果，从而依先后顺序流出色谱柱，通过适当的检测手段，对分离后的各组分进行测定。　　高效液相色谱是选用颗粒很细的高效固定相，采用高压泵输送流动相，分离、分析、定性及定量全部分析过程都通过仪器来完成的一种重要液相色谱法。除了有快速、高效的特点外，它能分离沸点高、分子量大、热稳定性差的试样。　　它的定性方法是用与标准品对照的方法，即采用保留时间对照法，当某两种物质在相同的色谱条件下保留时间相同时，就认为是同一种物质。　　它的定量方法有很多，如外标法、内标法、面积归一法等。我们采用面积归一法，即用一定量的标准品进样，记录其峰面积，然后进未知样品，根据未知样品的峰面积与标准品的面积比，计算某物质的含量。计算公式：　　AiWsWi=As　　其中Wi是未知物中被测物的浓度或质量，Ws是标准品的浓度或质量，Ai、As分别是被测物和标准品的峰面积。　　三、高效液相色谱仪的构造　　1、高压输液系统：贮液器、高压泵、过滤器和梯度洗脱装置　　2、进样系统　　3、分离系统：柱系统　　4、检测器：2487紫外检测器　　5、控制和数据处理系统　　四、试剂　　1、流动相：80%甲醇+20%水。　　2、微量注射器：50μL。　　3、苯、甲苯、二甲苯；样品混合物均用甲醇配制　　五、实验步骤　　1、接通电源，启动四元高压泵。设定A泵为运行泵、流速为mL/min，用流动相平衡色谱柱30min。　　2、打开紫外检测器，输入所需波长：254nm。　　3、打开电脑，在开始→程序→M32打开操作程序。进行方法设置　　4、点击moniter，监视基线5—10min。　　5、基线平稳后，点击工作栏上方的“停止”键，点击“进样”键。　　6、用微量注射器抽取40—50μL标样，针头朝上排出气泡后，扎入进样孔，快速注射，迅速将进样阀柄扳下。　　7、待样品峰全部显示后，再进行标样2及样品的测试。　　8、点击工作栏上方的“查看”，进行保留时间、面积积分记录。　　9、实验做完后，用甲醇作流动相，冲洗色谱柱30min，进行封柱。　　10、关机：先关程序，然后关紫外检测器、四元高压泵，最后关电源。　　六、数据处理　　1、测定每一个标准样品的保留时间和峰面积。　　2、测定未知样中每一个峰的保留时间，与标准样色谱图比较，标出未知样中每一个峰代表什么化合物。　　3、测定未知样中每一个峰的峰面积，用标准样品的峰面积，计算未知样中相应化合物的含量。　　七、思考题　　1、在该色谱条件下，苯、甲苯和二甲苯的保留时间各是多少？　　2、如何确定混合样中各组分的含量？　　篇一：高效液相色谱实验报告　　高效液相色谱实验报告　　一、实验目的　　1了解液相色谱的发展历史及必威体育精装版进展2学习液相色谱的基本构造及原理　　3掌握液相色谱的操作方法和分析方法，能够通过hplc分离测定来对目标化合物的分析鉴定。　　二、实验原理　　液相色谱法采用液体作为流动相，利用物质在两相中的吸附或分配系数的微小差异达到分离的目的。当两相做相对移动时，被测物质在两相之间进行反复多次的质量交换，使溶质间微小的性质差异产生放大的效果，达到分离分析和测定的目的。液相色谱与气相色谱相比，最大的优点是可以分离不可挥发而具有一定溶解性的物质或受热后不稳定的物质，这类物质在已知化合物中占有相当大的比例，这也确定了液相色谱在应用领域中的地位。　　高效液相色谱可分析低分子量、低沸点的有机化合物，更多适用于分析中、高分子量、高沸点及热稳定性差的有机化合物。80%的有机化合物都可以用高效液相色谱分析，目前以已经广泛应用于生物工程、制药工程、食品工业、环境检测、石油化工等行业。　　三、高效液相色谱的分类　　吸附色谱法、分配色谱法、空间排阻色谱法、离子交换色谱法、亲和色谱法、化学键合相色谱法　　四、高效液相色谱仪的基本构造　　高效液相色谱至少包括输液系统、进样器、分离柱、检测器和数据处理系统等几部分。1输液系统：　　包括贮液及脱气装置、高压输液泵和梯度洗脱装置。贮液装置用于存贮足够量、符合hplc要求的流动相。高效液相色谱柱填料颗粒比较小，通过柱子的流动相受到的流动阻力很大，因此需要高压泵输送流动相。2进样系统：　　将待测的样品引入到色谱柱的装置。液相色谱进样装置需要满足重复性好、死体积小、保