课件：CYC基因多态性与丙戊酸血药浓度相关性.ppt

三、关于下一步实验的设想 1、针对目前实验的不足，下一步的工作中可在以下几个方面进行完善 样本量不足 继续收集血样，扩大样本量，进行更广泛深入的研究 相关基因仍有待研究 陆续开展CYP2A6、UGT等与丙戊酸血药浓度相关性研究 未考虑合并用药影响 丙戊酸钠合并用药常为卡马西平，苯巴比妥一类CYP450s诱导剂，影响丙戊酸血药浓度，应纳入研究 未研究不良反应发生率 监察患者不良反应与丙戊酸血药浓度，服药剂量，基因型的关系 2、关于实验的其他设想 在上述工作取得进展后，我认为还可以在如左所述几个方面开展工作，以取得丙戊酸个体化用药研究的新突破 共同为提高癫痫患者的生命质量而努力 多中心联合建立丙戊酸患者相关基因库 对相关基因型与血药浓度数据进行量化研究，建立模型 进行前瞻性研究，变用药后的血药浓度监测为基因检测的用药前预测和指导 致谢 本文是在临床药学室童卫杭老师的悉心指导下完成的，在此谨对导师的辛勤奉献和热情关怀致以最诚挚的感谢。 刘丽宏主任和马萍副主任也对本文进行了严格的督导，丁春雷、雷宁、李鹏飞、吴诚、杨润涛、张晓菲老师在实习期间给予了耐心的教导和无私的帮助，在此表示衷心的感谢。 感谢厦门大学领导和老师的教育与培养，为我们提供了良好的学习氛围和文化视野。 感谢实习队友张琼娥、林玉香和唐静的陪伴与帮助。 谢谢远在家乡的母亲，兄长及各位好友，谢谢他们无私的关爱和支持。 厦门大学医学院本科毕业论文 欢迎各位批评与指正 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 可编辑 可编辑 厦门大学医学院本科毕业论文 CYP2C19基因多态性与丙戊酸血药浓度相关性研究 答 辩 人：罗 静 指导教师：童卫杭 主管药师 主要内容 研究背景 1 实验方法 2 实验结果 3 分析讨论 4 第一部分 研究背景 药物耐受及低药效 毒副作用及不良反应 AEDs需合理的临床 个体化用药 传统的“标准化用药” 癫痫——第二大神经系统顽症 一线抗癫痫药（AEDs） 体内代谢个体差异大 丙戊酸钠（Sodium Valproate, VPA） 一线抗癫痫药，目前仍无法取代 可用于多种类型的癫痫发作 图1.丙戊酸分子结构 Fig.1 molecular structure of valproic acid Ⅰ相线粒体内β-氧化 Ⅱ相尿苷酸二磷酸葡萄糖醛酸酶(UGT)的酸化 细胞色素P450酶(CYP450)的代谢 未发现相关酶的基因多态性 UGT酶基因的突变位点及突变频率未知 CYP2C19中国人群突变率较高，突变位点研究成熟 药代动力学（PK）复杂，个体差异大 体内 代谢途径 相关酶的 基因多态性 研究CYP2C19基因多态性与丙戊酸血药浓度相关性具有临床研究价值 CYP2C19最主要的两个突变位点 CYP2C19*2:第5外显子681位 G→A CYP2C19*3:第4外显子636位 G→A 基因型鉴定：聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP） PCR：模拟体内DNA复制条件，体外酶促合成特异DNA片段的循环反应，以扩增目的DNA。 RFLP：某种限制性内切酶特异性识别位点，对DNA切割； 基因突变时特异性酶切位点消失，不被限制性内切酶切断； 利用电泳检测，观察条带分析基因型。 PCR-RFLP特点：操作简便，耗时耗费低 本实验中将采用准确度受公认的基因测序法验证该法的准确性 产生终止密码，过早终止蛋白合成，产生无活性CYP2C19酶，降低对丙戊酸代谢 第二部分 实验方法 一、数据收集 2008年9月至2009年4月 第二炮兵总医院神经内科、神经外科门诊及住院部 服用丙戊酸钠的癫痫患者49例 筛选资料齐全的30例 记录性别、年龄、体重、治疗药物、治疗剂量、治疗药物血药浓度、合并用药等情况。 二、血药浓度检测——荧光偏振免疫法（FIP） 美国Abbott公司TDxFLx荧光偏振免疫测定仪及配套试剂盒 服用丙戊酸至少5个半衰期（2-2.5天）后，血药浓度达稳态时，于下次服药前，采抗凝静脉血4ml。 离心，取上清液（血浆）100μl，进样测定。 三、基因型鉴定 1、提取DNA: 北京QIAGEN公司血液基因组提取试剂盒 提取所收集血样DNA 北京六一仪器厂DYY-II2型电泳仪和电泳槽 DNA样品电泳检测 紫外灯下判读结果，照相存档 2、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP） 2.1 PCR反应 德国Eppendof公司PCR扩增仪 设计并合成CYP2C19引物： CYP2C19