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各种显带技术 中南大学医学遗传学国家重点实验室 C显带 将染色体用碱或者去垢剂处理后，再用 Giemsa 染色，可以得到只显示着丝粒区域的 带纹，称为 C—带。 实验原理 70年代用原位杂交的方法证明深染的区域（C 带区）是结构异染色质的区域，也就是一般而 言的DNA高度重复序列的区域。然而，现在更 为流行的看法认为氢氧化钡或其它碱性物质的 处理是优先提取了非C带区的DNA，SSC的处 理有助于带型的清晰。 实验用品 实验方法 3、氢氧化钡处理：将标本浸入60-65℃的5%（饱和）氢氧化钡液中，10秒至几分钟（随标本龄而变动，常规：1-4分钟；1月龄片：8-16分钟，最好设置梯度），碱性处理可能通过产生一个高水平的DNA变性，促进DNA溶解。 4、 2×SSC处理：在60-65℃的2×SSC液中处理90分钟时，用自来水冲洗干净，2×SSC温育可使DNA骨架断裂并使断片溶解。 5、 染色：用蒸馏水配制5%Giemsa，染色5-10分钟，用自来水冲洗干净，室温下风干后即可镜检。 6、 镜检：用显微镜高倍镜镜下检查显带标 本，如着丝粒区域或异染色质部位（1,9,16号染色体次缢痕）及Y染色体长臂q12深染，染色体其它部位染色浅，即为可取标本。若观察到染色体均呈白色，那么，可能是碱处理或2×SSC温育过度。 显带观察 巴黎会议（1971）对各条染色体的C带描述如下: 1号 大，从着丝粒扩展到q。 2号 小。 3-8号 中等 9号 大，从着丝粒扩展到q。 10号 中等。 11号 中等，但比10号或12号大些。 12号 中等。 13号 中等，有时分为二节。 14号-15号 中等。 16号大，从着丝粒向q扩展。 17号 中等。 18号 中等，但比17号大些。 19-22号 中等。 X 中等 Y在着丝粒处有一条非常窄的带；q的末端有一宽带。1，9，16号的C带和Yq上的宽阔的远侧带都有明显的形态变异及异态性。 R显带 在细胞的培养过程中加入碱基的类似物， 然后用紫外线照射后再用 Giemsa 染料染色， 可以得到和 G—显带相反的带纹，称为 R— 带。 实验原理 实验用品 光学显微镜、恒温水浴箱、紫外灯、培养皿、 常规制片材料、BrdU、秋水仙素、2×SSC溶 液（0.3mol/L NaCl+0.03mol/L柠檬酸钠）、 Gimesa染液等。 实验方法 注意： 1. Brdu的浓度和作用时间是实验成败的关键。 2.紫外灯照射距离玻片太远也不利于带型的显示。 3. 若为女性标本，还可见淡染的迟复制X 。 显带观察 R显带总体图 G11技术 实验用品 实验方法 注意事项： 1、染色体玻片片龄一般不要超过一周，且在显 带之前最好再次75℃烤片5分钟。 2、pH值为11是显带成功的关键。 3、染色时间可先摸索，如整个背景为蓝色、次 缢痕未出现，可相应地延长染色时间；如整 个背景为紫红色、次缢痕不明显则可相应地 缩短染色时间。 显带观察：9号长臂次缢痕显紫色 Q显带 实验原理 实验用品 实验方法 Caspersson等（1971）的方法： 取用空气干燥标本的玻片→浸入95%、70%、50%的乙醇和蒸馏水使其吸水→浸入pH7的柠檬酸/磷酸盐缓冲液中→用预温至20℃芥子喹吖因（50ug/ml）染液染色20分钟 →在上述缓冲液中漂洗三次，每次5分种→然后用缓冲液盖片封存→在荧光显微镜下观察。 显带观察 1号染色体： 短臂由远端的弱荧光节段逐渐过渡到一 中等荧光节端，后者可分为两条带。长臂有5 条中等荧光带，中央一条最明显，次缢痕的 荧光阴性。 几种显带的制作方法之间的关系 Ｎ显带 实验原理 其中最简单而又准确的方法是银染法,即利用 硝酸银将具有转录活性的核仁形成区(rRNA 基因)特异性地染成黑色,人们将这种银染阳性 的核仁形成区称为Ag-NOR,它们是具有转录 活性的18SrRNA基因和28SrRNA基因所在的 部位。 由于具有转录活性的rRNA基因(rDNA)往往 伴有丰富的酸性蛋白质,该类蛋白质含有巯基 （-SH）和二硫键（-S-S-）,能使AgNO3中的 Ag+还原成Ag颗粒,因此有转录活性的核仁形 成区常被镀上银颗粒而呈现黑色,没有转录活 性的NOR则不着色。