缓激肽B1受体在慢性炎性皮损区痒感觉中的作用-麻醉学专业论文.docxVIP

硕士学位论文缓激肽B 硕士学位论文 缓激肽B 1受体在慢性炎性皮损区痒感觉中 的作用 硕士研究生：刘玉英 指导教师：季文进教授 摘要 研究背景及目的 痒所描述的是一种引起机体产生抓挠欲望的不愉快感觉，其被认为是机体 的一种自我防护反应。最近的研究表明：痒是一种独立于痛温触压觉之外的躯 体感觉，同时，神经纤维与非神经纤维的细胞共同参与异常痒感觉的发生发展， 这种观点逐渐受到人们的关注。皮肤作为机体最大感受器官，有密集的感觉神 经纤维分布，是各种机体感受的初始阶段。特应性皮炎患者伴有难治性的瘙痒 感觉，该症状与患者局部皮损区慢性炎性微环境息息相关。慢性全身性疾病如 肾脏疾病、肝脏疾病、胆道疾病、恶性肿瘤或艾滋病等也常伴随慢性难治性瘙 痒，该症状应用传统抗组胺药物治疗无效。慢性痒感觉与急性瘙痒感觉不同， 搔抓行为不能减轻其瘙痒感受，反而可以诱发瘙痒感觉，从而形成“瘙痒．搔抓． 瘙痒”恶性循环加重瘙痒感觉。 课题组前期研究观察到在痛敏研究常用CFA模型中，局部皮损区应用致痛 物质缓激肽诱发小鼠搔抓反应，且小鼠搔抓反应不能为应用吗啡所减弱，缓激 肽Bl受体参与此异常痒感觉的调节。同时，TRPVl抑制剂辣椒平对缓激肽在 CFA炎性皮损区引起的异常痒感觉并没有明显影响，认为CFA炎性皮损区缓激 万方数据 摘要肽引起瘙痒发生机制与其他机制所引起瘙痒不同。 摘要 肽引起瘙痒发生机制与其他机制所引起瘙痒不同。 特应性皮炎患者血浆和组织激肽释放酶水平增加，这两种酶可使无活性的 激肽原释放出活性激肽，包括缓激肽和胰激肽。缓激肽是肽类物质，不能透过细 胞膜，需要与细胞膜上特异性受体结合才能发挥生物学作用。通常情况下，缓激 肽对B2R具有激活作用，但必须通过羧肽酶作用水解为des—Arg(9)-bradykinin或 者des．Arg(10)．kallidin才能激活Bl受体。缓激肽是介导炎症反应重要的炎性肽， 是目前己知的最强致痛物质及重要的炎症介导因子，同时也有研究认为其可参 与多种生物活性物质的调节，或是直接激活或间接增敏TRPVl通道。 缓激肽作用于激肽Bl受体(kinin B1 Receptor，B1R)和激肽B2受体(kinin B2 Receptor，B2R)，都是细胞型G蛋白偶联受体，B2R为组成性表达，激活后 很快内化失活，B1R在正常生理状态下除在中枢神经系统组成性表达以外几乎 不表达，而在白介素、细菌脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)、创伤、炎症等 多种情况下诱导而快速产生，是一种可诱导性受体，能被持续激活而不失活。 那缓激肽受体是否参与慢性炎性环境慢性自发性瘙痒感觉形成，其不同受体在 该过程中的意义有待说明。我们选择关于慢性痒感觉研究常用的二苯基环丙烯 酮(diphenylcycl叩ropenone DCP)引起的接触性皮炎模型，观察探究缓激肽受 体在慢性炎性自发性瘙痒中的可能调节形式及机制。 研究方法 本研究均选用雄性SPF级C57BL／6J小鼠，鼠龄5～6周龄，体重20--一259， 购置于广东省医学实验动物中心(中国，佛山)。实验动物的使用及处理方法 均符合广东省医学科学院动物实验伦理委员会的要求，并严格按照规定减少动 物痛苦，尽可能减少实验动物的使用数量。 小鼠于实验前在七氟醚麻醉下颈背部皮肤剃毛，分别于第一天及第七天在 颈背部剃毛区域局部涂抹I％DCP 0．1ml(或者溶剂丙酮对照组)，之后进行行 为学观察，观察前放置于透明塑料盒(22cmxl2cm×10cm)内预适应30min， 观察时间为30min，一只动物只做一次实验。首先对模型构建评价。成功建立 小鼠颈背部慢性炎症自发性瘙痒模型后，根据预实验观察小鼠自发性瘙痒情况 万方数据 硕士学位论文后选择DCP涂抹后第十天，将小鼠于实验前30min给予B1R拮抗剂／B2R拮抗 硕士学位论文 后选择DCP涂抹后第十天，将小鼠于实验前30min给予B1R拮抗剂／B2R拮抗 N／蛋白酶抑制剂。 C57小鼠在行为学观察后，在七氟醚麻醉后取颈背部炎性皮损区(或者丙 酮对照组)全层皮肤，蛋白表达量检测的部分离体后立即放入液氮中保存过夜 再放入．80℃长期保存；mRNA表达水平检测的标本离体后采用以DEPC水去 RNA酶处理后的组织，剪切至长度约3--一5mm组织块，即用RNALater完全浸 没后，4。C过夜，弃去RNALater后．80℃长期保存。之后用于检测Bdkrbl蛋白 及mRNA表达水平。用于原位组织染色的标本在行为学观察后，在七氟醚麻醉 后以4％多聚甲醛溶液进行心脏灌注，灌注成功约10分钟左右，取颈背部炎性 皮损区(或者丙酮对照组)全层皮肤投入4％多聚甲醛中常温固定过夜。再取 出皮肤标本进行脱水处理及石蜡包埋，切片，恒温箱中45℃拷片过夜或60℃2