柚皮苷通过Fas膜受体通路调控髓核细胞凋亡的机制研究.pdf

天 津 中 医 药 年 月第 卷第 期 ２０ 18 6 35 6 466 Ｔｉａｎｊｉｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Jun. ２０ 18熏Ｖｏｌ ．35 Ｎｏ ．6 ： DOI 10.11656/j .issn.1672-1519.20 18.06.17 Fas 柚皮苷通过 膜受体通路调控髓核细胞 凋亡的机制研究* 1，2 2 2 2 苑珍珍 ，杨 召 ，金鸿宾 ，许海委 （1．天津中医药大学，天津 300 193 ；2.天津医院，天津 3002 11） 摘要 ：[ 目的] 观察中药骨碎补单体柚皮苷（Naringin ）对人退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响，为治疗椎间盘退变提 供理论依据。[方法] 对体外培养的人退变椎间盘髓核细胞利用番红O 染色和甲苯胺蓝染色进行鉴定，并对P3 代细 胞分别用柚皮苷0 g/mL（对照组）、柚皮苷20 g/mL、柚皮苷40 g/mL、柚皮苷80 g/mL 的培养基培养人髓核细胞48 h ，噻唑 蓝（MTT ）法选择其抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡的最佳浓度，并用流式细胞仪测定各组细胞凋亡率。实时定量聚 合酶链锁反应（qRT-PCR ）检测Fas、FasL、Caspase-8 基因表达。蛋白免疫印迹法（Western-blot ）检测Fas 蛋白表达。[结 果] MTT 法和流式细胞检测均测定20 g/mL 柚皮苷为抑制髓核细胞凋亡的最佳浓度（P0.05 ）。qRT-PCR 检测20 g/mL Fas FasL Caspase-8 mRNA P0.05 Western-blot 20 g/mL Fas 柚皮苷能够抑制 、 、 表达 （ ）。 检测显示 柚皮苷能够抑制 、 FasL、Caspase-8 蛋白表达。[结论] 柚皮苷可能通过调控Fas/Fasl 死亡受体凋亡通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡。 关键词 ：柚皮苷；人髓核细胞；凋亡；椎间盘；退变 中图分类号 ：R285.5 文献标志码 ：A 文章编号 ：1672-1519（2018）06-0466-04 椎间盘退变是引起颈腰部疾患的前提和基础。 （北京东胜泰博科技有限公司，北京）；CO2 培养箱 有统计显示，世界上一半以上的人口会受到颈腰痛 （Hera-cell 公司，德国），恒温摇床（Heidolph 公司， [1] 的困扰 。椎间盘连接上下两个椎体，是维持脊柱结 德国），倒置显微镜（OLYMPUS 公司，日本），细胞培 构与功能的重要组成部分。髓核细胞是构成椎间盘 养板（ 公司，美国），高通量实时荧光定量聚 Corning 的主要成分，可以合成和分泌细胞外基质，在椎间 合酶链锁反应（PCR ）仪（Roche 公司，瑞士），百级层 盘退变过程中发挥着重要作用。骨碎补是治疗肾虚 流细胞室（天津医院细胞工程室）。 腰痛的常用药，具有补肾壮骨，活血止痛的作用。柚 1.3 方法 皮苷作为其主要组成单体，研究显示其具有抑制髓 1.3.1 人退变椎间盘髓核细胞的分离和培养 将 [2] 核细胞退变的作用，但作用机制报道较少 。本