olc1基因在吸烟致癌过程中相关作用机制的研究肿瘤学基础专业论文.docxVIP

北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文 北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文 目录 2．小鼠香烟暴露及样本收集 114 3．总RNA样品的制备与鉴定 ．115 4．基因芯片检测mRNA表达谱 ．．11 6 5．芯片数据分析 11 9 6．实时荧光定量PCR分析 ．．119 7．分子生物学实验方法 121 8．细胞生物学方法 124 9．免疫组织化学分析 126 全文总结 127 参考文献 129 本学位研究课题受以下基金资助 137 至殳谢 ．．1 38 独创性声明 1 39 学位论文版权使用授权书 139 万方数据 北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文 北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文 图表索弓 图表索5l 图1．1 美国2016年内恶性肿瘤预计新发病例和死亡病例前10位 ．．1 图1．2 吸烟导致肺癌发生过程分子事件示意图 ．．2 图1．3 OLCl基因在吸烟致癌过程中作用研究策略 ．11 图2．1 非小细胞肺癌肿瘤组织OLCl的免疫组化染色代表性图像 13 图2．2 ESCRT复合体的组成及其相互作用 18 图3．1 CSC处理所致肺癌细胞A549和H1299的细胞毒性 22 图3．2 CSC处理上调肺癌细胞中OLCl蛋白水平 23 图3．3 NNK、MCA和B[a]P处理不影响细胞OLC 1蛋白水平 ．．24 图3．4 经CSC处理24小时后两种肺窟细胞的总mRNA榭及其变懒 25 图3．5 A549细胞经CSC处理后差异表达基因显著富集的KEGG通路 28 图3-6 H1299细胞经CSC处理后差异表达基因显著富集的KEGG通路 ．30 图3．7 构建稳定过表达OLCl的肺癌细胞株 3 1 图3．8 稳定僦OLCl后两种啼蝴盹总mRNA榭及其变懒 32 图3-9 A549细胞稳定过表达OLCl后差异表达基因显著富集的KEGG通路 ．．34 图3．10 H1299细胞稳定过表达OLCl后差异表达基因显著富集的KEGG通路 一3 7 图3．1 1 经(SC处理24 d州后两f幌氯交婊达OLCl肺寤黜总mRNA表齿觏赠转眦趋张38 图3．12 A549／OLCl细胞经CSC处理后差异表达基因显著富集的KEGG通路 41 图3．13 H1299／OLCl细胞经CSC处理后差异表达基因显著富集的KEGG通路 ．．43 图3．14 CSC她里燃伽，，或砖移非黼删9细撼攀蒴弦葬表逸魏蚕慨览 44 图3．1 5 CSC处理、过表达OLCl，或两者共同作用于A549细胞诱导的差异表达基因形成 I拘pathwaynetwork ．．．．． ．．．．．．．．． ． 45 图3一16 CSC处理A549／OLCl细胞的差异表达基因减去CSC处理的A549细胞的交集差异 表达基因后的193个基因，在两者中的表达趋势 47 图3．17 CSC处理A549／OLCl细胞的差异表达基因减去与CSC处理的A549细胞的交集差 异表达基因后的基因集(193个)的GO富集分析 ．48 图3．1 8 候递烩趔耋因在A549／OLCl细胞mRNA表齿普起始R钵中盼础步验证 ．49 图3．19 A549／OLCl细胞中特异差异表达的“免疫／炎症／癌变相关”基因 51 图4．1 OLCl基因工程小鼠鉴定示意 ．63 图4．2 C57BL／6J／OLCl小鼠与WT小鼠肺组织差异表达基因聚类分析 64 图4．3 C57BL／6J／0LCl小鼠与WT小鼠肺组织差异表达基因GO富集 65 图4．4 C57BL／6J／OLCl小鼠与WT小鼠差异基因显著富集的KEGG通路 ．66 图4．5 C57BL／6J／OLClsi小鼠与WT小鼠肺组织差异表达基因聚类分析 67 IV 万方数据 北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文 北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文 图表索弓 图4．6 C57BL／酬G吧a戚小鼠与Wr小鼠肺组织差异表达基因GO富集 68 图4．7 C57BL／6J／OLClsi小鼠与Wr小鼠差异基因显著富集的KEGG通路 69 图4．8 WT小鼠短期香烟烟雾暴露后肺组织差异表达基因聚类分析 ．71 图4-9 WT小鼠短期香烟烟雾暴露后肺组织差异表达基因GO富集 ．72 图4．10 Ⅵ小鼠短期香噙氍雾厮差异表’媾因显著粼KEGG通路 ．．73 图4．11 C57BI脚，C1小鼠j彭瓣剽琐瞎镙霜后肺组织差幕毒哒基因聚类分析 74 图4．12 C57BU6J／OLCl小鼠短期香烟烟雾暴露后肺组织差异表达基因GO富集 75 图4．13 C57BU6J／OLCl小尉面豫孰驰灞暴露屁封霸耽璧眍煜著粼KECK3通路 ．．76 图4．14 C5’7BI／6哥侈￡Clsi小鼠短期香炬晦甥霭强靳动秘彤霓壶异表达基因聚类分析 77 图