食管鳞癌中ajuba突变的分子机制及临床意义临床医学专业论文.docxVIP

摘要 摘要 实验背景：食管癌是世界第八大肿瘤，占据肿瘤导致死亡的第六位，其中绝大部分 食管癌的病理类型为鳞癌，但是食管鳞癌的五年生存率只有不足15％，近年来总生 存期也没有明显的延长，这跟目前缺少有效的治疗有关。随着高通量测序技术的发 展，在多个食管鳞癌队列当中发现AJUBA基因突变，而相关研究是匮乏的，探索 AJUBA突变在食管鳞癌发生发展中的分子机制及临床意义，可能改善患者的预后， 提供新的治疗靶点。 实验方法：本论文收集了五个食管鳞癌的队列，共545例患者，都有临床信息及全 外显子组测序数据，通过统计学分析AJUBA突变与患者TNM分期的相关性，分别绘 制AJUBA突变型与野生型患者的Kaplan—Meier曲线，通过Log-Rank比较两者是否 有显著差异，以获得可能的AJUBA突变的临床意义，指导进一步的机制探索及临床 应用。同时，运用293T细胞包装慢病毒，慢病毒感染目的细胞构建可供研究AJUBA 突变的稳转细胞系，这包括稳定敲降的细胞系，过表达野生型AJUBA的细胞系及过 表达突变型的细胞系，通过流式荧光分选、潮霉素／嘌呤霉素进行筛选，RT-PCR及 蛋白印迹进行验证。在构建细胞系基础上，进行CCK-8、Transwell细胞功能实验， 体外验证AJUBA突变与细胞增殖、迁移及侵袭的关系。 实验结果：在545例患者当中，AJUBA突变型及野生型的TNM分期没有显著差异 (Fisher确切概率p=1．000)，AJUBA突变型患者Kaplan．Meier曲线有生存时间更 长的趋势(Log．Rank检验p=0．13)。构建稳转敲降细胞株，感染后10日通过潮霉素 ／流式荧光分选进行筛选，RT-PCR及蛋白印迹验证有一定的敲降效率，但是敲降效 率不高。构建过表达野生型及突变型细胞株，通过嘌呤霉素进行筛选，运用蛋白印 迹技术验证，可见野生型AJUBA条带及截短的突变型AJUBA条带，构建稳转过 表达细胞系成功。通过CCK-8比较过表达细胞系与野生型细胞系的增殖能力，发现 三个过表达细胞系的增殖能力都强于野生型细胞系(t检验48h：p0．001，p0．001， p0．001；72h：p=0．008，p0．001，p0．001)。Transwell实验比较过表达细胞系 与野生型细胞系的迁移及侵袭能力，三个过表达细胞系的迁移能力强于野生型细胞 系(t检验：p0．001，p0．001，p0．001)，过表达野生型AJUBA及突变1的侵 袭能力强于野生型细胞系(t检验：p0．001，p=0．035，p=0．576)，其中过表达野 生型AJUBA细胞系的迁移及侵袭能力增强最为显著。 结论：AJUBA突变型的食管鳞癌患者预后相对于AJUBA野生型的患者有更好的趋 势。构建稳转敲降细胞系可作为进一步研究的对照，并为构建敲降后过表达突变型 4 万方数据 AJUBA的细胞系打下基础。过表达突变型细胞系可供研究AJUBA突变，作为进一 AJUBA的细胞系打下基础。过表达突变型细胞系可供研究AJUBA突变，作为进一 步体外体内实验的基础。过表达野生型及突变型AJUBA的KYSE450细胞系具有 更强的增殖能力。过表达野生型及突变型AJUBA的KYSE450细胞系具有更强的 迁移和侵袭能力(除了突变2的侵袭能力)，其中以过表达野生型AJUBA的细胞 系增强的更为明显。 关键词：食管鳞癌；AJUBA；突变；预后 万方数据 Abstractcallcer Abstract callcer and the Background：Esophageal cancer is the eighth most frequently diagnosed sixm 1eading cause of cancer death worldwide,most of which iS esophageal squ锄ous cell 5％；F’洲 1 carcinoma(ESCC)．The 5．year overall surviVal rate of ESCC remains below due to the lack of signific觚t iml)roveIIlents in overall survival have been achieved e彘ctive merapies．As high-throughput sequencing technique adVallced，佗search钉s knew little about ideInified seVeral AJUBA mutations in a few cohorts．However,we the mutationS of AJUBA．It may be important to study th