三种真菌毒素蛋白质微阵列检测方法的初步研究以及抗四环素多克隆抗体的制备营养与食品卫生学专业论文.docxVIP

摘要摘要 摘要 摘要 l真菌毒素(Mycotoxin)是真菌产生的次级代谢产物，通常存在于霉变的 谷物中，一旦通过食物链进入人体后，将可熊造成致畸、致突变和致癌等严重 危害，因此在全球食品安全问题中备受关注。目前，真菌毒素的检测一般采用 高效液相色谱法(}糟LC)或酶联免疫吸附法(暑USA)，蓠者检测灵敏度离，僵 样品前处理烦琐、操作复杂、时间长，所需设备较昂贵；后者操作简便、快速， 健每次只缝完成一种真菌毒素的检测。因此，具有高通量优点的蛋自质微阵列 技术将是真菌毒素多残留快速检测的发展趋势。本研究在前期已制备出玉米赤 霉烯酮(Zearelenone，ZEN)、黄益霉毒素Bl(Aflatoxin Bl，AFBI)和脱氧雪腐镰 刀菌烯醇(Deoxynivalenol。DON)三种真菌毒素人工抗原及其相应单克隆抗体 的基础上，采用间接竞争的检测原理，以荧光作为检测信号，对ZEN、AFBl和 DON蛋鸯质微阵列检测方法进行了初步研究。结果如下： (1)ZEN、AFBl和DON蛋白质微阵列单指标检测的研究 采用芷交实验分别确定了ZEN、AFBl和DON人工抗原的最佳煮阵浓度 为40／zg／mL、40 pg／mL和20／tg／mL，对人工抗原固定条件、封闭方式和二抗 浓度进行了单因素优化，确定了4℃过夜固定、37℃20 min封闭和2／．tg／mL 羊抗鼠I鐾G．CY3：抗为三个单因素实验的最佳条件，进而以ZEN、AFBl和 DON标品分别进行间接竞争抑制实验，绘制了ZEN、AFBl和DON蛋白质 微阵列单撬标检测的标准趋线，灵敏度(1c50分别为2．1 ng／mL、0．29 ng／mL和 86．8 ng／mL，线性检测范围分别为0．5．10 ng／mL、0．125．1．0 ng／mL和50．400 ng／mL· (2)同时检测ZEN、AFBl和DON蛋白质微阵列的初步研究 在研究结果(1)的基础上，进行了同时检测ZEN、AFBl和DON-蚤白质 微阵列的初步研究，确定了羊抗鼠毽G．CY3二抗的最佳浓度为4／嚏g／mL，以 ZEN、AFBl和DON标准品同时进行间接竞争抑制实验，绘制了同时检测 ZEN、AFBl和DON蛋白质微阵列的标准曲线，灵敏度(1锄)分别为1．3 ng／mL、0．154 ng／mL和70．4 ng／mL，线性检测范围分别为0．75．6 ng／mL、 0．125-0。6 ng／mL和25．200 ng／mL，均满足我国规定的最高允许限量的检测要求。 珏 摘要 摘要 2四环素(Tetracycline，TC)是由链霉菌产生的一种碱性广谱抗生素，因 价格低廉，抗菌效果较好，在畜禽类养殖业中广泛使用，不可避免将造成动物 体内四环素的残留，即使残留量很小，但长期食用，对人体健康仍具有很大的 潜在危害。因此，对四环素残留进行及时检测是预防和控制其危害的有效手段。 本研究进行了抗四环素多克隆抗体的制备研究，旨在建立四环素的免疫学检测 方法。结果如下： 采用甲醛一步连接法(Mannich反应)分别制备了四环素偶联阳离子化牛 血清白蛋白(TC-cBSA)人工抗原和四环素偶联卵清白蛋白(TC．OVA)人工抗 原。经紫外图谱鉴定后，以TC-cBSA为免疫原对三只BALB／C雌性小鼠进行 背部皮内免疫，经三次加强免疫后，以TC．OVA为检测抗原采用间接ELISA检 测抗血清效价，并采用间接竞争ELISA检测抗血清特异性及交叉反应。竞争抑 制曲线表明三只小鼠均产生了抗四环素的特异性抗体，其中2号小鼠抗血清效 价最高，为1：32000，半量抑制浓度(IC；50)为173．78 ng／mL，该抗血清仅与土 霉素存在44．7％的交叉反应率，与链霉素、氯霉素和阿莫西林的交叉反应率均 小于0．01％。 关键词：真菌毒素；蛋白质微阵列；四环素；酶联免疫吸附法 Ili AbstractABSTRACT Abstract ABSTRACT 1 Mycotoxin is the secondary metabolic product of fungus，often existing in moldy grains．Once entering humans body,it may cause serious danger,like deformity,mutation or cancer and SO on．Therefore，it is fully concerned in global food security．At present，I-IPLC and ELISA are adopted in the test of Mycotoxin，of which the former is of higll sensitivity but the pre