钙化型乳腺癌基于蛋白质组学技术的血清诊断模型的建立和钙化机制的研究外科学专业论文.docxVIP

博士论文 博士论文 钙化型乳腺癌基于蛋白质组学技术的血清诊断模型的建立和钙化机制的研究 钙化型乳腺癌基于蛋白质组学技术的 血清诊断模型的建立和钙化机制的研究 中文摘要 乳腺癌是严重危害妇女健康的一种恶性肿瘤，乳腺X线检查是目前全世界公认 的应用于大范围人群乳腺癌筛查的最主要的影像学检查项目。乳腺x线筛查中经常会 发现乳腺的钙化灶，同时乳腺癌也常常伴随钙化的表现，甚至有时钙化是临床现有 乳腺癌检查手段所能发现的唯一征象。这对钙化病灶的良恶性鉴别提出了更高的要 求。血清组分变化可充分反映机体生理、病理过程，容易获取并易于监测，故一直 是筛选疾病诊断标记物的最佳研究对象。目前常用的乳腺癌血清标记物主要为 CAl5-3、CAl2-5、CEA等，特异性和敏感性不能满足临床需求。为此，筛选血清中差 异蛋白十分必要。 目前研究认为乳腺癌的发生发展是多因素参与的多环节的病理过程，传统的单 基因研究模式限制了肿瘤相关因素的研究发展。近年来迅速发展的蛋白质组学研究， 是对基因组所编码的所有蛋白质进行研究的学科，能动态、整体、定量地考察疾病发 生发展过程中全部蛋白质种类和数量的变化，对于探讨疾病发病机理、寻找疾病诊 断的特异性标志物和药物治疗的靶标来说，是一种有效的高通量的研究模式，可获 得一些传统手段无法得到的新蛋白标志物、新关键分子，极大地丰富了诊断标志物 的选择组合，并且有助于复杂致病机理的全面阐明。通过蛋白质组学的研究，使我 们对肿瘤的发生、发展有了更详尽的理解，并能够通过发现特异的分子标志物来预 测患者和治疗效果和预后。 表面加强激光解吸电离一飞行时间质谱(surface—enhanced laser desorption／ionization，time—of—fl ight， mass spectroscopy，SELDI—TOF—MS) 是蛋白质组学新兴运用的技术，已有众多的研究组利用该技术在患者体液中发现了 能够早期诊断肿瘤的标志物。双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis， 2-DE)是基于质谱测定的蛋白质组学的标准方法。基质辅助激光解吸电离一飞行时 间质谱(matrix-assisted laser desorption／ionization，time—of—flight，mass spectroscopy，MALDI-TOF-MS)分析肽质量指纹图谱则是检测双向凝胶电泳分离的 蛋白的常规工具。MALDI-TOF-MS通过计算肽的飞行时间进行分析，而飞行时间则和 肽的质荷比相关。将获得的肽质量的数据和序列数据库中已知蛋白的数据进行比对， 博士论文 博士论文 钙化型乳腺癌基于蛋白质组学技术的血清诊断模型的建立和钙化机制的研究 就可以获得较为明确的蛋白鉴定结果。 糖基化是最常见的蛋白质修饰，在恶性肿瘤中，大约50％以上的蛋白质都有糖 基化发生。许多疾病的发生与蛋白质糖链结构异常有关。分析疾病相关的蛋白质糖 基化改变，在探求疾病诊疗策略和发现诊断标志物方面扮演着越来越重要的角色。 本课题的研究目的就是希望通过I临床工作中数字化乳腺X线检查结果，分析乳 腺钙化的类型、分布、病理特征等规律，应用SELDI-TOF-MS技术通过对人钙化型乳 腺癌、无钙化乳腺癌、良性钙化和良性无钙化对照组患者血清的蛋白质组表达谱差 异分析，在乳腺X线提示钙化的乳腺癌患者的血清中寻找与钙化可能相关的分子标记 物，建立乳腺癌，尤其是钙化型乳腺癌血清蛋白质组的诊断模型，对其进行验证和 评价。并且应用2一DE和MALDI—TOF-MS技术筛选鉴定血清中与乳腺癌钙化的差异蛋白 质分子，应用复合蛋白质组学(multiplexed proteomics，肝)技术，获得血清糖 蛋白质修饰谱；然后应用免疫沉淀和多种凝集素印迹分析差异蛋白的糖链结构的改 变与乳腺癌钙化发生的关系，为进一步探讨乳腺癌钙化的形成机制建立工作基础。 第一部分乳腺x线检查中乳腺钙化的特点与规律分析 目的：分析钙化在乳腺x线成像中的类型、分布、病理特征等规律。评价钙化在乳 腺癌X线诊断中的意义。 方法：自2006年3月至2008年2月数字化乳腺X线检查的病人3812例，其中女性3807 例，男性5例。乳腺X线摄影常规双乳拍摄头尾位(craniocaudal，cc)、外斜位 (mediolateral oblique，MLO)。378例病人乳腺x线摄影检查后在我院接受了手术治 疗。所有病灶均经手术后病理证实。观察分析乳腺钙化灶的大小、分布及病理特征。 对64例浸润性导管癌标本进行雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和C-erbB-2免疫组 织化学染色分析。采用x 2检验和F