青枯菌的基因标记及马铃薯青枯病抗性相关信号途径探究蔬菜学专业论文.docxVIP

华中农业大学2016届硕士研究生学位论文2．2．5青枯菌UW551的电击转化 华中农业大学2016届硕士研究生学位论文 2．2．5青枯菌UW551的电击转化 20 2．2．6青枯菌转化子的鉴定 20 2．2．7 GUS染色 21 2．2．8青枯菌的接种方法 21 2．2．9抗病评价方法 22 2．2．10 RNA提取和荧光定量PCR 22 2．2．11数据统计分析方法 ．23 3结果与分析 24 3．1 UW551的定点插入载体构建及青枯菌标记菌株的获得 ．24 3．1．1 pH7C—PpsbA-GUS载体构建 24 3．1．2 pRC-UW551载体构建 。25 3．1．3 pRC-UW551-PpsbA—GUS载体构建 26 3．1．4 pRC-UW551-PpsbA·GFPuv载体构建 27 3．1．5 GUS标记菌株UW551：：GUS的获得 28 3．1．6 GFPuv标记菌株UW551：：GFPuv的获得 ．．29 3．2 UW551：：GUS致病力测定 30 3。3青枯菌在马铃薯抗感材料中的侵染过程 32 3．3．1用于侵染观察的抗感资源筛选 32 3．3．2青枯菌在C9701中的侵染过程 ．．34 3．3．3青枯菌在MRL79．1中的侵染过程 。36 3．3．4青枯菌在MRL79．2和MRL79．3中的侵染过程 36 3．4抗病相关信号途径转基因株系的青枯病抗性鉴定 ．．40 4讨论 43 4．1青枯菌中基因标记技术的应用 ．．43 4．2青枯菌在抗感材料中的侵染定殖差异 ．．43 4．3抗病相关信号途径在马铃薯青枯病抗性中的作用 ．．44 参考文献 ．45 致谢 。55 Ⅱ 万方数据 青枯菌的基因标记及马铃薯青枯病抗性相关信号途径探究摘 青枯菌的基因标记及马铃薯青枯病抗性相关信号途径探究 摘 要 马铃薯(Solanum tuberosum L．)是继玉米、水稻、小麦之后的全球第四大粮食作 物。马铃薯在保障中国的粮食安全中起着重要的作用。马铃薯青枯病是仅次于马铃 薯晚疫病的马铃薯第二大病害，严重威胁马铃薯品质和产量。而对于马铃薯青枯病 的研究相对匮乏，马铃薯青枯病的抗性遗传机制、抗性分子机理现在尚不清楚。青 枯菌中缺乏成熟稳定的基因表达系统，限制了对马铃薯青枯病的研究。本研究通过 建立一个稳定的青枯茵基因表达系统，将基因标记技术应用到青枯菌中。进而研究 青枯菌在马铃薯抗感材料中的侵染定殖差异。本研究主要结果如下： 1．利用构建的青枯菌定点插入载体成功将GFPuv和GUS报告基因插入到青枯 菌UW551菌株的基因组中，得到了青枯菌标记菌株UW551：：GFPuv和UW551：：GUS， 使其能够稳定的表达GFPuv和GUS基因。UW551：：GUS菌株的致病力测定实验表 明，UW551：：GUS和野生型UW551菌株相比致病力没有明显差异，因此可以利用 UW551：：(mS菌株进行后续的马铃薯与青枯菌互作的组织学分析。 2．马铃薯近缘野生种青枯病抗性评价实验表明，UW55l具有很强的致病性而 大多数马铃薯近缘野生种都没有较强的青枯病抗性。＆morelliforme种的三个材料 MRL79．1、MRL79-2、MRL79．3和感病对照C9701相比感病程度明显较轻，具有 一定的青枯病抗性。但这种抗性最终会被青枯菌克服，最终还是表现出青枯病的症 状。MRL79．1、MRL79．2和MRL79．3之间的抗性水平也存在着差异。MRL79．1抗 性最弱，发病程度高于MRL79．2和MRL79．3。 3．UW551：：GUS菌株接种MRL79．1、MRL79．2、MRL79．3和C9701后进行 GUS染色，分析它们与青枯菌互作时在组织水平的差异。实验表明青枯菌可以通过 根尖、侧生根和根部伤口进行侵染。青枯菌在感病材料C9701根部大量繁殖，穿透 维管束组织后能进入茎部、叶片维管束和叶肉组织。抗病材料＆morelliforme可以 抑制青枯菌其在根部的侵染和繁殖。 4．通过比较马铃薯栽培品种E3野生型和其抗病相关信号途径的转基因株系的 青枯病抗性，表明StBAKl基因和茉莉酸信号途径可能在马铃薯的对青枯病的抗性 中发挥作用。 关键字：马铃薯；青枯菌；抗性；侵染过程；信号途径 万方数据 华中农业大学2016届硕士研宄生学位论文Abs仃act 华中农业大学2016届硕士研宄生学位论文 Abs仃act Following the maize，rice and wheat，potato(Solanum mberosum L．)is the world’S fourth—largest food crop。Potato will play a key role in the government’S pla