补肾抗衰片对电离辐射损伤后小鼠造血作用的研究药学专业论文.docxVIP

北京协和医学院中国医学科学院硕士研究生学位论文摘要 北京协和医学院中国医学科学院硕士研究生学位论文 摘要 随着核与辐射技术快速发展及其在人类生活各方面的应用，人们受到辐射照射 的潜在危险日渐增多。造血系统对辐射极其敏感，射线对造血干细胞(HSC， Hematopoietic stem cells)产生杀伤的同时，也对HSC赖以生存的造血微环境造成 损伤。本课题选择活血中药复方——补肾抗衰片(BSKS，Bushen Kangshuai tablet)， 以期改善骨髓造血微环境，促进HSC自我更新，探讨BSKS在小鼠辐射损伤后造 血重建中的作用。 骨髓间充质干细胞(MSC，Mesenchymal stem cell)是造血微环境重要的基质 细胞。本研究通过全骨髓贴壁法分离得到骨髓MSC，并根据其多向分化潜能进行成 骨方向诱导，通过碱性磷酸酶(ALP，Alkaline phosphatase)活性检测及矿化结节 茜素红染色对诱导培养的细胞进行鉴定，结果表明经诱导培养出来的细胞具备成骨 细胞(OB，Osteoblasts)的表性特征和活性。根据OB来源于MSC这一特点，间接 验证了全骨髓贴壁获取的细胞为MSC。 本研究对接受6．0 Gy 7Cs-丫射线照射小鼠口服给予0．75 gg、1．5 gg、3．0 gg 体质量BSKS水溶液，检测与小鼠HSC、MSC增殖活力有关的脾结节(CFU．S，Colony forming unit of spleen)、成纤维细胞集落形成单位(CFU—F，Fibroblast colony—forming unit)、粒．巨噬细胞集落形成单位(CFU—GM，Granulocyte macrophage colony—forming unit)以及以MSC为饲养层的二维共培养粒．巨噬细胞集落形成单位(2D CFU．GM， Two dimension granulocyte macrophage colony—forming unit)等指标，观察BSKS对 HSC以及骨髓造血微环境重要基质细胞MSC的保护作用。结果表明，BSKS可以促 进CFU．S、CFU．GM克隆形成，即增强HSC增殖；BSKS促进CFU．F克隆形成，即增 强MSC增殖能力；BSKS促进2D CFU．GM克隆形成，说明经BSKS作用后的MSC对 HSC的增殖有促进作用。其中BSKS 1．5 gag剂量组效果比较明显。以BSKS 1．5 g瓜g 剂量组作为实验组，对照组给予同体积生理盐水，两组小鼠接受6．0 Gy 7Cs．Y射线 照射后，对其进行骨髓病理组织学检查。结果发现，BSKS可以保护辐射损伤小鼠 骨髓基质细胞和造血细胞，结果具有显著性差异。 通过检测经2．0 Gy射线照射24 h及经6．0 Gy射线照射7 d后小鼠骨髓嗜多染 红细胞(PCE，Polychromatic erythrocyte)微核发生率，观察BSKS对辐射后小鼠 骨髓血细胞遗传损伤的保护及促进恢复作用的影响。结果显示，药物组(BSKS 1．5 眺g剂量组)微核率明显比照射对照组降低，结果具有显著性差异。 接下来研究BSKS对辐射损伤小鼠外周血的影响。对小鼠进行6．0 Gy 7Cs．Y 射线照射，检测外周血白细胞(WBC，White blood cell)、红细胞(RBC，Red blood cell)、血小板(PLT，Platelet)数目。结果显示，经Y射线照射7 d后，BSKS对辐 射损伤小鼠外周血WBC、RBC、PLT有升高作用，结果无显著性差异。 万方数据 北京协和医学院中国医学科学院硕士研究生学位论文通过MSC与骨髓细胞共移植，探究经BSKS作用的MSC对辐射损伤小鼠生存 北京协和医学院中国医学科学院硕士研究生学位论文 通过MSC与骨髓细胞共移植，探究经BSKS作用的MSC对辐射损伤小鼠生存 情况的影响。采用眼角静脉丛移植法，观察干细胞共移植后30天内小鼠的生存情 况。结果表明，经BSKS作用的MSC与骨髓细胞共移植可以推迟小鼠出现死亡的 时间，且小鼠的生存时间较对照组长。 为进一步探究BSKS作用机制，本研究应用亚致死剂量照射小鼠急性辐射损伤 模型，通过Western Blot法检测BSKS对小鼠骨髓MSC中造血相关因子Jaggedl表 达水平的影响。结果显示，对照组和实验组均有Jaggedl阳性表达，而两组表达量 并无显著性差异。 关键词：补肾抗衰片；电离辐射损伤；造血重建；间充质干细胞；造血干细胞 万方数据 ———————————————————————————————————————————————————————————一一一 ———————————————————————————————————————————————————