老年性痴呆细胞模型.pptVIP

1.神经细胞 (1)原代培养的海马神经细胞 海马与学习记忆有关，也是发生衰老变化最早部位。AD病理改变最严重的脑区之一是海马。 (2)原代培养的大脑皮质神经细胞 大脑皮质是人类高级中枢，是构成脑内复杂突触连接的关键脑区。早已明确，大脑额、顶、颞叶参与学习记忆活动。 ① Aβ诱导建立AD细胞模型, Aβ导致大脑皮质细胞凋亡 ②氰化钠诱导原代培养的大脑皮质神经细胞，建立 AD细胞模型，观察内源性神经细胞缺氧引起的损伤 培养的海马神经元对损伤因素较培养的大脑皮质神经细胞敏感,但皮质神经细胞比海马细胞容易分离和获取,二者出现的生物化学、组织病理学及形态学的改变基本相似。 (3)原代培养的小脑颗粒细胞 (4)NG108-15细胞系 NG108-15细胞系是小鼠成神经细胞瘤和大鼠神经胶质瘤的融合杂交系。在两种不同的培养条件下此细胞系可分别处于分裂生长状态和分化成熟状态。NG108 15细胞系经培养诱导其分化10d后，加入Aβ1-40，继续培养48h，建立AD细胞模型。用此细胞系建立AD模型，培养系统稳定性较好，又具有神经细胞特性，具有一定的代表性。形态学有无改变有待于进一步的研究。 2.神经嵴源细胞 (3)P19细胞 3.神经胶质细胞 4.非神经细胞-淋巴细胞、成纤维细胞 AD患者中枢神经系统以外的许多组织也出现异常。因此AD是多系统受损的疾病。所以非神经元的外周细胞，如淋巴细胞、成纤维细胞等也被广泛用来研究观察AD有关的信号转导和胞膜流动性等。这一细胞模型最大优点是易获取、分离建立。 5.杂交组织细胞 (1)畸胎瘤AD杂交细胞NT2 AD 患者线粒体 DNA 突变导致细胞色素 C 氧化酶（COX）功能障碍，引起生物能量降低和活性氧产物增加，最终导致细胞凋亡。采用 DNA 结合诱变剂溴化乙锭，选择性的耗尽人畸胎瘤细胞株内源性线粒体 DNA，然后与 AD 患者血小板内的线粒体 DNA 杂交获取畸胎瘤 AD 杂交细胞 NT2，作为AD细胞模型。此杂交的细胞株可用于研究 AD线粒体的电子转移链酶COX活性、静态或动态下钙平衡、自由基、Aβ 产生、 沉积等变化。NT2 畸胎瘤 AD 杂交细胞株，在细胞和亚细胞水平概括了 AD发病机制及病理组织学方面的特异性改变，为进一步研究 AD 的病理学及治疗学提供了一个较好的体外模型。 6.基因工作细胞株 AD是一种只发生在人类的神经退行性疾病，因此限制了其生物学方面的研究。随着生物医学遗传工程技术的发展，体外建立基因工程细胞已成为现实，这一模型的缺点是技术难度大，花费高。 * * 老年性痴呆的细胞模型 汇报人：赵梦岚 1.神经细胞. 2.神经嵴源细胞. 3.神经胶质细胞. 4.非神经细胞. 5.基因工程细胞 AD 细胞模型是在体外进行诱导和建立，与 AD 动物模型相比较，具有可避免各种干扰因素，实验条件容易控制等优点。 6.杂交组织细胞 不同结构片段的Aβ产生不同的神经生物效应： ① Aβ1~38的活性与Aβ1~40及Aβ25~35一致; ② Aβ1~28的毒性作用小于Aβ1~40; ③ Aβ1~16和Aβ17~28无神经营养和神经毒性作用。 低浓度Aβ(40nmol/L)对海马神经元是营养作用; 高浓度Aβ(100nmol/L)对成熟的神经元是毒性作用,对于分化早期的神经元,Aβ表现为神经营养作用。 Aβ25~35和Aβ1~42诱导培养的海马神经细胞建立AD细胞模型, 引起海马神经细胞退变是通过凋亡途径。 Loo、Watt Yankner Aβ诱导的AD细胞模型表明细胞发生脂质过氧化较严重,自由基生成增加,细胞出现凋亡改变,与AD发病机制中自由机和细胞凋亡学说相符,再则选用此种细胞类型更贴近实际AD受损细胞。但也存在以下缺陷： ① 原代细胞培养难度大，周期长。 ② 培养系统不够稳定。 ③ 只能模拟出AD的部分病理改变。 此模型表现为细胞凋亡和Aβ产生增加,较符合AD的病理改变,与前两种原代培养的细胞相比,细胞易获取和培养。 小脑是参与学习记忆脑区之一，因此小脑神经细胞也是进行AD研究可取的细胞。 降低细胞外钾离子的浓度,诱导建立AD模型,检测细胞Aβ水平,提示原代培养的小脑颗粒神经元发生退行性变可导致Aβ过量产生,而Aβ过量产生又可加重神经元的损伤。 缺点为：细胞类型不是AD受损最显著细胞，培养系统缺乏稳定性。 Step 1 Step 2 Step 3 Title in here 凋亡 Title in here 与凋亡密切相关的 p75NGFR 高度表达 Title in here Bax 蛋白 表达水平上调 皮肤内神经嵴源上皮黑素细胞，具有来源、形态、反应方式及许多分子信号与神经细胞相似的特点。当NGF与Aβ同时加入上皮黑素细胞，可预防由Aβ诱导的黑素细胞凋亡，因此，人类上皮黑素细胞