卡式配作血讲座.pptVIP

Diana System戴安娜凝胶卡式血型配血系统 　李晓荣 　血　库 内 容 临床输血历史的简单回顾 红细胞血型血清学检测技术简介 如何保证临床输血配型相符 Diana Gel凝胶卡式检测法的工作原理、特点以及方法学评价 Diana Gel凝胶卡式检测法的临床应用 回顾总结 临床输血历史的简单回顾 1667年法国御医Jean用羊血治疗精神病患者 临床输血历史的简单回顾 1818年英国产科医生James 首次用人血输治患者 临床输血历史的简单回顾 1900、1940年奥地利科学家Landsteiner等人先后发现了ABO和RH血型系统，使输血治疗有了牢固的科学基础，从而极大地提高了临床输血的安全性 1937年世界上第一个血库在芝加哥Cock County医院建立，标志着输血开始成为临床医学的重要组成部分和常规治疗手段 现在输血已经发展成一门涉及多学科的独立的边缘学科——输血学，今天我要讲的免疫血液学检测技术只是其中一部分 红细胞血型血清学检测技术简介 盐水凝集法 低离子强度盐水法 酶技术 凝聚胺技术 抗人球蛋白检测法 凝胶卡式检测法 一、盐水凝集法 红细胞和抗血清在盐水溶液中直接反应 特点是操作简便，设备简单，缺点是影响因素多，灵敏度低 二、低离子强度盐水法 通过降低介质溶液的离子强度，减少红细胞外围离子云的强度，促进IgG分子在两个红细胞间桥联，而促进凝集 特点是缩短抗原抗体反应时间，提高反应灵敏度 三、酶技术 利用木瓜酶或菠萝酶破坏红细胞表面唾液酸，使红细胞失去电荷，缩小细胞间距离 同时改变红细胞膜表面结构，使某些隐蔽的抗原暴露，从而增强凝集反应 主要用于一些不完全抗体的检测 四、凝聚胺技术 利用多聚季胺盐在介质溶液中产生大量正电荷中和红细胞表面的负电荷，减少红细胞间排斥，促进凝集 五、抗人球蛋白检测法—Coombs试验 在盐水凝集法或低离子强度盐水法的基础上，加入抗人球蛋白抗体，通过抗人球蛋白抗体的特异性桥连作用，促进红细胞的凝集 六、凝胶卡式检测法 是微柱凝胶技术与上述所有技术相结合的产物 1986年由法国人Dr.Yves Lappierre发明 1994年获得美国FDA认证，目前在许多发达国家已经作为常规技术应用于临床 如何保证输血配型相符 ? 掌握准确的病人信息：了解病人的输血史和实验室检查结果 选用最可靠的实验方法：尽可能采用灵敏度和特异性最高的实验技术 避免人为错误：实现自动化，减少人为错误的发生 引入全面质量控制的观念：实验室所有操作程序要标准化，要有质量控制标准（如引进GMP和ISO9000质量控制体系） 戴安娜凝胶卡式检测法的工作原理 凝胶微柱：试管上端、柱体 过滤介质：颗粒直径26-103 nm的葡聚糖100凝胶，凝胶间缝隙只允许游离红细胞通过 缓 冲 液：LISS（加或不加抗血清） 戴安娜凝胶卡式检测法的工作原理 将红细胞和抗血清加在凝胶上部反应，离心后观察 凝集的红细胞，被阻挡在小柱中凝胶的上部或中央，证明发生凝集反应，判断凝集反应阳性 游离的红细胞，被挤过装有过滤介质的小柱，而到达小柱的底部，证明未发生凝集，判断凝集反应阴性 结果判读模式 戴安娜凝胶卡式检测法的特点 灵敏度和准确性高，重复性好 不需要清洗红细胞 自动化程度高 可以实现全自动操作 实验全过程标准化 标准化的孵育时间、离心时间以及结果判读 消除了主观因素对弱反应结果的判读，减少了人为错误的发生 实验结果客观性强，而且稳定，可以长期保存 获得ISO9000\CE认证 凝胶抗人球试验—凝胶凝集试验与抗人球技术结合 事先在凝胶微柱中的LISS缓冲液中加入AHG,实验中,将红细胞与抗血清加入凝胶上部,离心后观察 如果抗体能结合在红细胞表面,那么通过凝胶内AHG桥联,红细胞发生凝集,判断凝集实验阳性 如果抗体未能结合在红细胞表面,那么红细胞不能凝集,判断凝集实验阴性 凝胶酶试验—凝胶技术与酶技术结合 在凝胶上层加入酶试剂，利用木瓜酶或菠萝酶减小红细胞间阻力，促进红细胞凝集 凝胶卡式检测法的方法评价——卡式检测法与低离子强度盐水法、手工凝聚胺法的比较 　 1990年，卡式检测法的发明人Dr. Yves Lapierre等用低离子强度盐水法（试管法）、聚凝胺试验（试管法）和卡式检测法（凝胶）研究了400例已知抗体的样本。血清与细胞的比例是按照试管法标准配置。结果为： 卡式检测法检出359例（检出率为90%） 聚凝胺试验检出301例（检出率为75%） 低离子强度盐水法检出243例（检出率为61%） 结论 灵敏度高　凝胶卡式检测法灵敏度比低离子盐水法、凝聚胺法都高；与Coombs法相近，但是在实验的标准化、重复性方面具有更大优势，更适合常规的红细胞血型血清学检测 避免了试管