用抗细胞表面分子单链抗体筛选和鉴别其相互作用肽！.PDFVIP

中国生物工程杂志 ， ， （）： )DLG. :LFNE%DGFKFHP #B #B 0 4 A 44 用抗细胞表面分子单链抗体筛选和 鉴别其相互作用肽! 许 静 李 侠 刘俊霞 何一心 韩忠朝 宋增璇!! （中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室 天津 !# ） 摘要 展示于噬菌体表面的肽库适于用抗体筛选其特异性结合表达肽。$%’()*+! 是一个抗 ,-*. 细胞表面分子的单链抗体，其抗原仍不清楚，为了筛选并鉴定其识别分子，用$%’()*+! 筛 选了 个展示于 噬菌体表面的人胎肝 片段库。经 轮生物吸附后分离单个阳性噬斑， * /0 %123 4 并对其表达产物做电泳分析及斑点杂交。结果鉴别出 个 结合肽， 5 克隆噬 * $%’()*+! $%’()*+! 菌体 插入片段的 扩增和序列分析结果表明它是 个 片段表达产物。 123 6)7 * 4!89123 :;3/ 分析 人类基因数据库，发现它 相同于 5 造血干 祖细胞 的 ，提示 =/ +0 )1!4 ? @723 * A 4!89 识别片段存在于人类造血干 祖细胞基因中，单克隆单链抗体 可能用于研究 $%’()*+! ? $%’()*+! 这些人类基因的性质。 关键词 单链抗体 /0 噬菌体 肽 造血干 祖细胞是造血系统中早期发育阶段细 ）及其碱性磷酸酶融合蛋白 （ ? 9D.HE($%’()*+! $%’( ［，］ 胞，其增值分化受控于细胞所在微环境的调控，而 ! 4 )*+!(36）均由本室制备 。 外源调节信号的产生必须伴有细胞表面分子的活 !# 方 法 化。关于造血干?祖细胞表面受体或粘附分子活化 *W# W * /0 噬菌体展示人胎肝%123 文库的构建 ［，］ * # C 所诱发的细胞增殖分化和移行已有不少报道 ， 按人胎肝%123 文库容量取! X * %YJ 菌液，扩增后 但仍存在许多空白。为探索新的细胞表面分子，拟 提取9/RL9DEV#(%123 质粒123，用!#$ S? %’( SSS 双 用抗造血干?祖细胞表面分子的单链抗体从人胎肝 酶切后作* 琼脂糖电泳，证明123 片段大小具有 %123 文库中分离其结合片段。本文用单链抗体富