干扰素诱导蛋白16对人血管外膜成纤维细胞增殖与迁移的影响及其机制-内科学(心血管病)专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2013 届硕士研究生论文 PAGE PAGE 3 干扰素诱导蛋白 16 对人血管外膜成纤维细胞增殖与迁移的影响及其 机制 内科学：心血管病专业；研究生：黄晶；导师：吴强 摘要 目的：研究干扰素诱导蛋白 16（interferon-inducible protein 16，IFI16） 对人脑血管外膜成纤维细胞（human brain vascular adventitial fibroblasts， HBVAF）增殖与迁移的影响及其可能机制，为该蛋白在血管增殖性疾病中的运用 提供更多的理论依据。 方法：培养 HBVAF 细胞，设未干预组、干扰素α（interferon alpha，IFN-α） 干预组(用终浓度为 2000kU/L~5000kU/L 的 IFN-α刺激细胞 24h)。蛋白免疫印迹 （western blotting）法分别测定各组细胞中 IFI16 蛋白表达水平。在 HBVAF 细胞中转染针对 IFI16 基因的小分子干扰 RNA (small interference RNA ，siRNA) 48 h 后, 用终浓度为 2000 kU/L 的 IFN-α干预细胞 24 h。同时以与 IFI16 基因 无关的 Control siRNA 作为阴性对照。实验设空白组、Control siRNA 组、IFI16 siRNA 组、IFN-α组、IFN-α+Control siRNA 组、IFN-α+IFI16 siRNA 组。流 式细胞仪测定细胞周期，细胞划线法与 transwell 法测定细胞迁移能力。应用 real-time PCR 法和 western blotting 法分别测定细胞中 IFI16、p53 及 p21 mRNA 和蛋白表达水平的变化。 结果：与未干预组比较，IFN-α（2000kU/L~5000kU/L）干预 HBVAF 后，IFI16 蛋白表达水平明显上调（P 0.05)，但不同浓度 IFN-α组之间无统计学差异。 然而与空白组比较，转染针对 IFI16 siRNA 后，HBVAF 中 IFI16、p53 及 p21 mRNA 和蛋白表达水平下调，增加了细胞 G1/S 期转换。IFN-α可诱导 HBVAF 中 IFI16、 p53 及 p21 mRNA 和蛋白表达水平上调，同时抑制细胞 G1/S 期转换与细胞迁移， 但在转染了 IFI16 siRNA 的 HBVAF 中 IFN-α的上述作用受到抑制。 结论：在 HBVAF 中 IFI16 存在结构性表达及 IFN-α 诱导性表达，但在 IFN-α 2000kU/L~5000kU/L 浓度范围内诱导表达未呈现剂量依赖性。IFI16 表达可以抑 制 HBVAF 细胞增殖与迁移，其部分机制可能与激活 p53、p21 的表达有关。 关键词：干扰素诱导蛋白；IFI16；成纤维细胞；细胞增殖；细胞迁移 第一部分 干扰素诱导蛋白 16 在人血管外膜成纤维细胞的结构性表 达与干扰素 α 的诱导表达 前 言 随着社会物质生活水平的提高，动脉粥样硬化、高血压、糖尿病等血管增殖 性疾病的发病率逐年上升，此类疾病引发的心、脑、肾、四肢血管狭窄、闭塞导 致相关器官缺血、坏死已成为这类疾病主要的致残、致死原因。针对这类疾病相 应的治疗方法如冠状动脉介入治疗、动脉内膜剥脱术、动脉旁路移植等在临床上 已广泛开展。这些治疗措施能快速缓解缺血症状，术后近期效果好，提高了患者 生存率和生活质量，但有相当一部分患者会在术后 3～6 个月内出现血管进行性 再狭窄，直至管腔闭塞，从而影响这类治疗的远期效果。目前运用 ACEI 类、钙 通道组织剂等临床药物作用于相应疾病的动物模型后，发现并不能有效地防止血 管成形术后的再狭窄[1]。因此针对血管增殖性疾病的治疗引起了广泛的关注。 研究发现血管重构是血管增殖性疾病及相关治疗术后再狭窄的主要病理生 理机制。血管壁及血管腔内多种细胞和细胞因子之间的相互作用在血管重构的发 生、发展过程中起着重要的作用。其中血管内皮细胞（vascular endothelial cell, VEC）、血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell, VSMC）在血管重构过程 中扮演者重要角色。一般情况下 VSMC 处于非增殖状态，血管内膜有完整的 VEC 覆盖。但当 VEC 受损时，血液中的生长因子和细胞分裂因子与 VSMC 表面相应 受体结合，使 VSMC 移行至内膜，恢复增殖能力。新生内膜下的 VSMC 能够分 泌大量的细胞外基质（extracellular matrixc，ECM）并沉积于内膜，使管腔进一 步狭窄。并且随着内皮损伤程度加重，也加速血管重构的进程，进一步促进管腔 狭窄，最终导致血管增殖