涤痰汤对老年MCI模型大鼠的干预作用及NMDA受体亚基表达的影响-中医内科学专业论文.docx

I I PAGE PAGE VI 中文摘要 目的：轻度认知功能障碍（mild cognitive impairment，MCI）属发 生在老年人群中常见的神经系统退行性病变，是介于正常衰老和痴呆 之间的一种临床状态，是老年痴呆的主要危险因素。中医学认为“呆 病多痰”，“治呆不治痰非其治也”。结合本课题组前期研究结果，我 们推测，β淀粉样蛋白的毒性作用和 NMDA 受体介导神经突触可塑性 相关分子机制表达异常是 MCI 的重要致病因素，可能与中医学痰邪致 病密切相关。本课题选用 13 月大鼠 D-半乳糖皮下注射合并半高脂饲 料喂养复合造模制作老年轻度认知功能障碍大鼠模型，从行为学、神 经病理、Aβ及其分泌酶、NMDA 受体亚基蛋白表达等方面，探讨涤痰 汤对 MCI 的作用及机制。 方法：13 月龄 SPF 级 SD 大鼠随机分为 5 组，即空白组、模型组、涤 痰汤高剂量组（以下简称“涤高组”）、涤痰汤低剂量组（以下简称“涤 低组”）、西药组，每组 12 只，另设 3 月龄 SPF 级 SD 青年大鼠 12 只 作为青年组对照。参照文献造模方法，将模型组、涤高组、涤低组、 西药组均每日颈背部皮下注射 D-半乳糖 50 mg?kg-1 体重，自正式实验 第 5 周起同时给予半高脂饲料喂食，至第 8 周末，构建老年认知功能 障碍大鼠模型。涤高组、涤低组、西药组大鼠，于第 5 周开始灌胃给 药，涤痰汤低、高剂量组给药量分别为涤痰汤折合生药量 4.275、 8.55g·kg-1 体重，西药组给药量为盐酸多奈哌齐 0.9mg?kg-1 体重，空 白组、模型组、青年组给予等容积的蒸馏水灌胃。各组均按 10 mL?kg-1 灌胃，每日 1 次，至第 8 周末止。采用 Morris 水迷宫、穿梭箱实验 观察各组大鼠学习记忆能力；生化比色法检测大鼠血清、皮质 SOD、 MDA 水平；光镜、透射电镜观察大鼠海马组织形态学变化；酶联免疫 吸附法检测大鼠海马 Aβ1-42 含量；免疫组化法观察大鼠海马组织 PS-1、PS-2 表达；生化比色法检测大鼠海马、皮质神经递质 Ach、Glu 含量；酶联免疫吸附法检测 NGFβ、BDNF 神经生长因子含量水平；免 疫组化法观察大鼠海马 NR2A、NR2B 表达情况，利用 realtime RT-PCR 检测 NR2A、NR2B 的 mRNA 表达量。 结果：1.涤痰汤对老年轻度认知功能障碍大鼠学习记忆及抗氧化能力 的影响:（1）Morris 水迷宫实验中，模型组大鼠较青年组、空白组 定位航行寻找平台逃避潜伏期、空间探索实验平台穿越次数、目标象 限时间均有显著性差异（P＜0.05）；与模型组相比，涤高组、西药组 潜伏期均明显缩短（P＜0.01），涤低组潜伏期亦缩短（P＜0.05）。 穿梭箱实验中，模型组较空白组大鼠电击次数明显增多（P＜0.05）， 主动逃避潜伏期时间显著延长（P＜0.01）；与模型组比较，涤高组、 涤低组、西药组大鼠电击次数、主动逃避潜伏期时间均有显著性差异 （P＜0.05）。（2）抗氧化能力：模型组较青年组大鼠皮质、血清 SOD 水平均显著下降（P＜0.05），皮质 MDA 水平均显著下上升（P＜0.01）； 与模型组相比，涤痰汤各剂量组大鼠血清、皮质 SOD 水平均显著升高 （P＜0.05），血清、皮质 MDA 水平均显著下降（P＜0.05）。 2.涤痰汤对老年轻度认知功能障碍大鼠海马组织形态学的影响： （1）海马 HE 染色结果：模型组大鼠海马 CA1 区大量神经元锥体细胞 结构破坏、排列分布散乱，大量细胞胞体缩小、正常锥体细胞数量明 显减少；与模型组相比，涤痰汤各剂量组正常锥体细胞数量明显增多。 （2）透射电镜结果：模型组与青年组比较，有髓神经纤维平均直径 增加，神经纤维髓鞘厚度明显增厚；与空白组比较，神经毡内突触数 量减少；突触间隙结构不清晰，突触前线粒体嵴模糊。与模型组相比， 涤痰汤各剂量组线粒体结构大致正常，突触间隙结构较清晰，突触后 膜的致密物质较厚。 3.涤痰汤对老年轻度认知功能障碍大鼠海马 Aβ1-42 含量及 PS-1、 PS-2 表达的影响：与空白组比较，模型组大鼠海马 CA1 区 PS-1、CA3 区 PS-2 阳性表达增多（P＜0.01），海马 Aβ1-42 含量上升（P＜0.05）。 与模型组相比，涤低组、涤高组大鼠海马 Aβ1-42 含量下降（P＜0.05）， 海马 PS-1、PS-2 表达均下降（P＜0.01）。 4.涤痰汤对老年轻度认知功能障碍大鼠海马神经递质及神经生 长因子含量的影响：与空白组相比，模型组大鼠的海马、皮质 Ach 含 PAGE PAGE VII PAGE PAGE IV 量均显著下降（P＜0.05），皮质 Glu 含量均显著上