PGFRβ在子痫前期患者胎盘中的表达及其意义.docVIP

PDGFR-P在子痴前期患者胎盘中的表达及其意义 谢育娣（厦门大学附属第一医院妇产科福建厦门361003） 】R714.24+5 】A 】1672-5085 （2012） 48-0020-03 】 目的探讨血小板源生K:因子受体beta（Platelet derived growth factor receptor beta, PDGFR-?庇子痫前期胎盘中的表达及其意义。方法采用RT-PCR 方法研究40例子痫前期和25例正常妊娠胎盘组织中PDGFR-? mRNA的表达;采 用免疫组织化学法研究40例子痫前期和25例正常妊娠胎盘组织中PDGFR-?蛋 白的表达及定位。结果子痫前期患者PDGFR-? mRNA及蛋白表达均显著高于 正常妊娠组（Plt;0.05）o结论子痫前期组胎盘组织PDGFR-?的mRNA、蛋白 高表达，PDGFR-?主要表达于绒毛毛细血管内皮，引起胎盘血管的动脉粥样硬化 改变（AS）,参与子痫前期的病理生理过程。 关键词】子痫前期胎盘PDGFR-? RT-PCR AS 子痫前期是妊娠期常见病，主要病理变化是全身小动脉痉挛，可能导致 全身多器官、多系统受损，胎儿宫内发育迟缓、死胎等不良后果，是围产期母婴 死亡的主要原因之一。但其病因尚未明确。近年来研究发现PDGFR过量表达，与 血中的血小板源生长因子结合产生生物学效应，导致胎盘及全身血管内皮功能失 调，产生高血压、蛋白尿等临床表现［1-2］。木文检测了 PDGFR-?在子痫前期患者胎 盘组织中的表达，以探讨其在子痫前期中的作用和临床意义。 1资料与方法 1.1研究对象和分组：选择2008年10月至2009年6月于厦门大学附 属第一医院剖宫娩的轻、重度子痫前期患者各20例。诊断标准参见《妇产科学》 第6版［3］。另选取年龄和孕周匹配的正常孕妇25例作为对照组。所有病例均除 外其它内外科合并症。病例组和对照组孕妇年龄和孕周差异无统计学意义（采用 成组t检验，t值分别为1.365和1.384, P均gt;0.05,见表1）。 1.2标本采集和处理：两组孕妇分娩后立即取其胎盘母体面(脐带附着 处对侧)绒毛膜板下绒毛组织约lOOmg,用冰生理盐水冲洗血液后立即放入液氮, 转移至实验室后贮存于-80deg;C超低温冰箱待行RT-PCR检测。另于该部位处避 开梗死和餌化区取胎盘组织约1.0cmtimes;1.0cmtimes;0.5cm人小，立即置于 10%福尔马林固定24h，包埋，制作蜡块，待行免疫组化及病理检查。 1.3实验方法 RT-PCR检测胎盘组织中PDGFR-? mRNA的表达 采用Trizol 一步法抽提RNA (试剂购自Invitrogen公司)，RNA浓度和 纯度经核酸分析仪分析，A260/A280在1.7?2.1之间。 按逆转录试剂盒(购自Pro mega公司)操作步骤吸取2mu;g总RNA 进行逆转录。 PCR 反应： 引物序列.? PCR 反应体系(25mu;l): cDNA0.25mu;g, MgCI2 1.5mmol/L, 1.0times;Buffer 和 dNTP 各 200mu;mol/L, Taq 酶 1.0U/25mu;L PDGFR-?和 GAPDH上下游引物分别为0.2mu;mol八、0.1mu;mol/L,加去离子水至25mu;l。 反应条件：94°C变性30s,59°C退火45s, 72°C延伸60s, 35个循环，终末延伸10 分钟。引物及PCR反应试剂由上海生物工程公司合成；(4)取PCR产物5mu;l电 泳、ImageMasterVDS-CL凝胶成像系统扫描，PDGFR-?和GAPDH的电泳条带灰度 积分比值表示PDGFR-?的相对表达含量。 1.3.2免疫组化法测定胎盘组织中PDGFR-beta;的表达及定位 免疫组化S-P法进行测定，一抗为兔抗人PDGFR-beta;多克隆抗体，一 抗稀释度为1: 100;二抗为鼠抗兔IgG。将蜡块进行切片、按试剂盒说明进行操 作。 结果评价标准：光镜(times;100)下观察，细胞膜或(和)细胞质中 有棕黄色颗粒为阳性染色。每张切片随机选取高倍(times;100)视野10个， 用高清晰彩色病理图像分析系统(HPIAS-100)测定切片图像的阳性反应平均灰 度值，即滴加上述一抗后的每张阳性染色切片图像平均灰度值(包括绒毛组成区 域背景区)与阴性对照切片图像的平均灰度值的差值。结果以平均灰度值 plusmn;标准差表示。 1.4胎盘组织病理学检查：将蜡块切片，行HE染色后于光学显微镜下 观察，比较对照组和子痫前期患者胎盘的病理变化。 1.5统计学方法 计量资料用均数plusmn;标准差(x-plusmn;s)表示，两个样本之间均 数比较采用成组t检验，多个样本均数的两