Wnt信号通路调控肺腺癌干细胞特性的分子机制-肿瘤学专业论文.docx

上海交通 上海交通大学硕士学位论文 I I 目 录 中文摘要 II 英文摘要 III 符号说明V 引言 1 正文 2 材料与方法 2 1.实验材料2 2.主要仪器设备3 3.实验方法4 4.统计方法8 实验结果 9 1.第一部分 Wnt 信号通路调控肺腺癌细胞干性特征 9 2.第二部分 靶向 Wnt 信号通路具有抗癌效应 16 3.第三部分 关于 Wnt 信号通路在肺腺癌细胞中的其他作用 23 讨论 28 总结 31 参考文献 34 综述 38 发表论文 66 致谢 67 II II Wnt 信号通路调控肺腺癌干细胞特性 摘 要 肺腺癌难治表现在增长失控、早期转移、耐药及抗凋亡。虽然潜在的分子机 制尚不清楚，但在某种程度上可能是由于肿瘤干细胞（CSCs）的存在。本篇用 成球实验富集干细胞，探讨了在成球实验的模型上，Wnt /β-catenin 信号通路能 够促进肺腺癌细胞成球和促进多潜能基因表达。成球细胞周期缓慢，相对静止。 肺腺癌异质性肿瘤细胞中慢周期循环细胞干性标志高表达，Wnt 信号通路高表 达；快周期循环的细胞干性标志低表达，Wnt 信号通路高表达。用慢病毒介导敲 除 PC9 细胞 β-catenin 基因，得到 Wnt 信号通路被抑制的 β-KD PC9 细胞。β-KD PC9 细胞周期循环加快，干性标志表达降低，提高了对常规化疗药物的敏感性。 采用药物干预调控 Wnt 信号转导通路具有潜在的抗癌效应。FDA 认证的抗蠕虫药 扑蛲灵（PP）激活 C1α 促降解非磷酸化 β-catenin 来抑制 Wnt /β-catenin 信号 通路转导，能够抑制 PC9 和 SPC-A1 细胞生长、降低干性标志和侵袭能力，以 及促凋亡。表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）是当前肺癌临 床治疗中备受关注的一类新药，对 EGFR 突变的细胞有显著疗效，在抑制 EGFR 通路的同时抑制 Wnt /β-catenin 信号通路，抑制生长，降低侵袭能力和诱导凋亡。 此外，发现 β-catenin 是多功能蛋白，不仅介导细胞核内信号转导，还在介导细 胞间粘附作用。这些结果表明 Wnt 信号通路在维持肺腺癌干细胞多潜能基因的 表达，肿瘤细胞的生长，侵袭，凋亡中起着至关重要的作用。 关键词：Wnt 信号通路 干细胞特性 耐药 转移 凋亡 肺腺癌 PAGE PAGE IV The Molecular Mechanism of Wnt signaling in regulating stemness of lung adenocarcinoma cells Abstract The refractory pulmonary adenocarcinoma is characterized by its growth out of control, early metastasis and resistance to cytotoxic agents and antiapoptosis. While the underlying molecular mechanism is unclear, the property of its refractory performance may mainly lie in the presence of highly resistant cancer stem cells(CSCs). Sphere formation assay was used to enrich the cancer stem cells. Then we examined the function of Wnt/β-catenin signaling in maintaining cancer stem cells in lung adenocarcinoma via this sphere-cell model. The sphere cells have been arrested in G0/G1 and remain relatively quiescent compared to the adherent cells. The slow-cycle cells of the heterogeneous tumor cells exalt the expression of stem-like-cell markers than the fast-cycle cells, in association with Wnt signaling pathway in lung adenocarcinoma. Lentivirus-mediated inactivation of β-catenin-