GB/T 15400-1994饲料中色氨酸测定方法　分光光度法.pdf

中华人 民共和 国国家标准 饲料 中色氨酸测定方法 GB/T 15400一94 分光光度法 Determinationoftryptophaninfeedstuffs -Spectrophotometry 1 主题内容与适用范围 本标准规定了测定饲料中色氨酸的原理和方法。 本标准适用于配合饲料、混合饲料、浓缩饲料和单一饲料。 2 引用标准 GB6433饲料粗脂肪测定方法 3 原理 饲料中蛋白质经碱水解后，降解成多肤和游离的氨基酸，在酸性介质中，氧化剂存在下，色氦酸U91 环与对二甲氨基苯甲醛反应生成蓝色化合物，在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。 4 试剂 除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。 4.1 硫酸(GB625)溶液、c(1/2H2SO4)=21.2mot/L 垦取589ml硫酸徐徐加入约350mL水中，冷却后用水稀释至1L. 4.2 1%对二甲氨基苯甲醛溶液: 1.0g对二甲氨基苯甲醛溶于21.2mot/L硫酸((4.1)中并定容100mL, 4.3 0.2%亚硝酸钠(GB633)溶液(m/V), 4.4 lo/氢氧化钾(GB2306)溶液(m/V) 4.S l,色氨酸，色谱纯。 4.6 1,色氨酸标准溶液: 准确称取25.0mgL一色氨酸于小烧杯中，加少量0.1MOl/I氢氧化钾溶液使之溶解，定量地转移 到250ml 棕色容量瓶中，用水定容，浓度为100pg/mL 注:本标准溶液4℃冰箱中保存，一个月内使用，浓度不变. 5 仪器、设备 5 1 分析天平:感量。.1mg, 2 5 分光光度计。 5 3 离心机:转速4000r/min, 4 5 实验室用粉碎机 国家技术监督局1994一12一30批准 1995一07一01实施 GB/T 15400一94 乐 ︺ ‘ 培养箱。 乐 八 匕 容觉瓶:25ml-,50mL,250mL, 5 7 口 10in[-具塞试管。 5 . O U 刻度吸管:。.5mL,2ml-5mL,25ml。 6 试样的制备 6.1选取有代表性的试样，按四分法缩分至200g，粉碎，全部通过。.25mm孔径筛(6。目) 6.2 按GB6433脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风干后，混匀，装入密封容器内备用。 了 分析步骤 了门 皿作曲线的绘制 7.1.1吸取色氨酸浓度为100pg/mL的标准溶液(4.6)5.00,7.50,10.00,12.50,15.00,17.50mL分 别置于25ml,棕色容量瓶中用水定容，摇匀。溶液浓度分别为20,30,40,50,60,70pg/m工一。 7.1.2 吸取各浓度溶液(7.1.1)1mL，分置具塞试管(5.7)中，空白管加1mL水。向每支试管内加入氢 氧化钾溶液((4.4)1ml，混匀，将试管放入冷水盆中，加5mL对二甲氨基苯甲醛溶液((4.2).从冷水盆中 取出试管，摇匀，在室温(20-30C，下同)放置30min, 7.1.3 向上述每支试管内加。.2mL亚硝酸钠溶液(4.3)，摇匀，室温放置25min, 7.1.4 以空白管调零，在590nm波长下，以1cm光径测定各溶液吸光度值。 7.1.5 以色氨酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制工作曲线，或列出回归方程式 7.2 样品测定 7.2.1称样:按附表A建议的称样量称取脱脂试样两份，精确至0_lmg, 7.2.2 水解:将试样置于50mL容量瓶((5.6)中，在轻轻振摇中缓慢加入25ml氢氧化钾溶液(4.4), 使试样湿润且不粘壁，置于4011℃培养箱(3.5)中水解16^18h, 7.2.3 离心:取出水解液冷却至室温后，用水定容，播匀，取部分水解液以4000r/min转速离心 15min, 7.2.4 显色:取2mL上清液置具塞试管((5.7)中，并将试管放入冷水盆中，加入5mL对二甲氨基苯甲 醛溶液(4.2)，摇匀。每个试样另取2mL上清液于具塞试管((5.7)中，加5m1硫酸溶液((4.1)作为样品 空白，摇匀，室温放置30mi