GB/T 15399-1994饲料中含硫氨基酸测定方法　离子交换色谱法.pdf

中华人 民共和 国国家标准 饲料中含硫氨基酸测定方法 GB/f 15399一94 -一离子交换色谱法 Determinationofsulfuraminoacidsinfeedstuffs -ionexchangechromatography 1 主题内容与适用范围 本标准规定了饲料中含硫氨基酸的测定方法。 本标准适用于单一饲料、配合(混合)饲料及浓缩饲料。 2 引用标准 GB/T6432饲料粗蛋白质测定方法 GB/T6439饲料水溶氯化物测定方法 3 原理 饲料中的含硫氨基酸(胧氨酸、半胧氨酸和蛋氨酸)用过甲酸氧化并经盐酸水解生成磺基丙氨酸和 蛋氨酸矾，此二产物可用离子交换色谱法分离测定。 4 试剂 除特别注明者外，所有试剂均为分析纯，水为去离子水，电导率小于1MS 4.1 过甲酸溶液 4.1.1常规过甲酸溶液:将30%过氧化氢(GB6684)与88%甲酸(HG3-1296)按1:9(V/V)混合，于 室温下放置1h，置冰水浴中冷却30min，临用前配制。 4.1.2浓缩料用过甲酸溶液:将常规过甲酸溶液中按3mg/mL加入硝酸银(GB670)即可。此溶液适 用于氯化钠含量小于3%的浓缩料。 当浓缩料中氯化钠含量大于3%时，氧化剂中硝酸银浓度可用下式计算: C,)1.454XmX蛛 ··························.……(1) 式中:C,— 过甲酸中硝酸银的浓度，mg/mL; C}— 样品中氯化钠含量，mg/mL; 。— 样品质量,mg, 4.2 氧化终止剂 4.2.148 氢澳酸(GB621) 4.2.2 偏重亚硫酸钠溶液:33.6g偏重亚硫酸钠(HG3-909)加水定容至100ML 4.3 酸解剂 国家技术监督局1994一12一30批准 1995一07一01实施 GB/T 15399一94 4.3.1 6.0mot/L盐酸溶液:将优级纯盐酸(GB622)与水按1:1(V/V)混合。 4.3.2 6.8mol/L盐酸溶液:将优级纯盐酸(GB622)1133mL加水稀释重2000ml。 4.4 7.5mol/L氢氧化钠溶液:取优级纯氢氧化钠(GB629)30g，加水溶解并定容至100ml- 4.5稀释上机用柠檬酸钠缓冲液，pH2.2,0.2mol/LNa:称取柠檬酸三钠(HG3-1298)19.6g，用水 溶解后加入优级纯盐酸16.5mL，硫二甘醇5.0mL,苯酚(HG3-1165)1g，最后加水定容至 1000ml,，用G4垂熔玻璃砂芯漏斗过滤。 4.6 不同pH及离子强度的洗脱用柠檬酸钠缓冲液:按仪器说明书配制。 4.了荀三酮溶液:取苟三酮适量，按仪器说明书配制。 4.8 磺基丙氨酸一蛋氨酸矾标准贮备液,2.50pmol/mL:准确称取磺基丙氨酸105.7mg和蛋氨酸矾 113.3mg，加水溶解并定容至250mL. 4.9 氨基酸混合标准贮备液:含有L一天门冬氨酸、L一苏氨酸等17种常规蛋白质水解分析用L-A基酸， 各组份浓度为2.50pmol/ml- 4.10 混合氨基酸标准工作液:吸取磺基丙氨酸一蛋氨酸矾标准贮备液((4.7)和氨基酸混合标准贮备液 (4.8)各1.00mL,置于50mL容量瓶中，加稀释上机用柠檬酸钠缓冲液((4.4)定容，混匀。有关各组份 浓度为50nmol/mL. 5 仪器、设备 5.1 实验室用样品粉碎机; 5.2 样品筛:孔径0.45mm(40目); 5.3分析夭平:感量0.0001g; 5.4 喷灯; 5.5 旋转蒸发器或浓缩器:可在室温至65℃间调温，控温精度士1C,真空度可低至3.3X10Pa (25mmHg柱) 5.6 恒温箱或水解炉; 5.7 氨基酸自动分析仪:要求蛋氨酸A的分辨率大于90X00 6 样品 取具代表性的饲料样品，用四分法缩减分取25g左右，粉碎并过0.45mm孔径(40目)筛，充分混 匀后装入磨口瓶中备用。 7 分析步驻 7.1氧化和水解:称取含