GB/T 17494-1998马传染性贫血病间接ELISA技术规程.pdf

GB/T17494-1998 前 言 马传染性贫血病(简称马传贫，下同)的流行，曾给我国养马业造成巨大的经济损失。经过多年的防 制，在全国范围内取得显著成效，已达到控制标准。为消灭马传贫，提供一个先进有效、特异敏感、反应快 速、操作方便、易于推广的检测方法，是十分必要的。为此制定马传染性贫血病间接ELISA技术规程。 马传贫间接ELISA技术自1983年建立以来，已在全国主要养马省区推广应用十余年之久，在马传 贫防制工作中发挥了重要作用。特别是研制的试剂实现了标准化、商品化，并以低耗优质的产品质量，为 该方法推广应用奠定了基础，在这方面我们已走在世界前列。 本标准的附录A、附录B,附录C都是标准的附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由中华人民共和国农业部畜牧兽医司归口。 本标准由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所负责起草。 本标准起草人:戴玉坤。 中华人民共和 国国家标准 马传染性贫血病间接ELISA技术规程 GB/f17494-1998 RulesofindirectELISAtechnique forequineinfectiousanemiadisease 1 范围 本标准规定了马传染性贫血病间接ELISA技术规程的测定原理、仪器设备、试剂、配制溶液、操作 步骤、结果判定。 本标准适用于检测马血清中的马传贫疫毒抗体。可用于生产和经营马匹者对未注射马传贫疫苗马 匹的检疫，马传贫病马的定性;也可用于对注射马传贫疫苗马匹的免疫状态进行测定。 2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均 为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准必威体育精装版版本的可能性。 NY127-1987 马传贫酶联免疫吸附试验(ELISA间接法)抗原、酶标记抗体制造及检验试行规 程 3 测定原理 用特制的马传贫病毒抗原(NY127)，包被聚苯乙烯微量板孔，使免疫反应在固相载体上进行。当被 检血清中有马传贫病毒抗体存在时，则与孔壁上的抗原形成抗原一抗体复合物，再与酶标记的抗体(抗马 免疫球蛋白)反应，最后通过测定酶作用底物催化后的产物，进行定性、定量抗体测定。 4 仪器设备 吸管:1mL,5mL,10mL; 量桶:50mL,100mL,1000mL; 烧杯:50mL,100mL; 玻璃滴管:每滴体积约20^-30pL; 血清稀释板:2。孔板每孔容积为1mL; 定量加液器:1mL分装定量; 微量吸液器:50pL,100pL; 分析天平:感量。.001g; 托盘夭平:感量。.01g; 水浴锅 ; 酶标测试仪。 5 试荆 除特别注明外，所用试剂皆为分析纯。 国家质f技术监督局1998一08一31批准 1999一01一01实施 GB/r17494-1998 磷酸氢二钠; 磷酸二氢钠; 氯化钠; 柠檬酸; 磷苯二胺(化学纯); 过氧化氢(浓度30%); 吐温-20(Tween-20); 白明胶(Gelatinwhite)(E.Merck); 健康牛血清(无污染); 浓硫酸(纯度95%-98%); 酶标记抗体(冻干品，活性和特异性应符合NY127，见附录A); 马传贫病毒抗原包被板(活性和特异性应符合NY127，见附录B); 阴性及阳性对照血清(冻干品，活性和特异应符合NY127). 6 配制溶液 6.1磷酸盐缓冲液(0.02mol/LpH7.2PBS) 6.1.10.2mol/L磷酸氢二钠溶液:称取磷酸氢二钠(NaiHPO,·12HzO)71.64g，先加适量的去离子 水加热溶解，最后定容至1000mL,混匀。 6.1.2 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液:称取磷酸二氢钠(NaH,PO,2H,O)31.21g，先加适量