生物化第一章后半.pptVIP

PCR扩增结果分析举例 M 1 2 3 4 5 6 7 M M, marker;1-2, PCR for CP4-EPSPS gene; 3-4, PCR for 35S Promoter; 5-6, PCR for lectin gene; 7, Negtive control. 聚丙烯酰胺凝胶：在由TEMED (N、N、N`、N`-四甲基乙二胺)催化过硫酸胺还原产生的自由基的存在下，丙烯酰胺单体的乙烯基聚合形成聚丙烯酰胺的线形长链，在交联剂N，N’-亚甲双丙烯酰胺的参与下的共聚合反应中，聚丙烯酰胺的交联链形成三维带状网格结构，链长和交联的程度就决定了凝胶的孔径，同时也决定了分离DNA的能力。 B 聚丙烯酰胺凝胶 琼脂糖凝胶制胶一般将EB直接加入 而聚丙烯酰胺凝胶制胶时不能将染料加入，会影响聚合。 1000bp 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 2DAP 6DAP 12DAP 第四节 核酸的研究方法 一 核酸的分离、提纯和定量测定 二 核酸的超速离心 三 核酸的凝胶电泳 四 核酸的序列测定 四　序列测定 1 DNA酶法测序 2 DNA的化学法测序 3 RNA的测序 1 DNA的酶法（末端终止法）测序 序列分析的自动化 DNA酶法测序自动化 使用4种荧光素标记的双脱氧核苷酸，毛细管电泳和激光扫描技术使测序自动化，一个泳道一次可测大约800-1000个核苷酸，测序已成为可以快速完成的常规技术。人类基因组测序已经完成，多态性的研究和功能基因组学已经成为研究的热点。 三 序列测定 1 DNA酶法测序 2 DNA的化学法测序 3 RNA的测序 2 DNA的化学法测序 Maxam和Gilbert 于1977年发明 基本原理:特异化学试剂作用与DNA分子中的不同碱基,然后切断反应碱基的多核苷酸链 DNA的化学法测序 3 RNA的测序 最常用的方法是逆转录成cDNA，用DNA测序的方法推断核苷酸序列。 序列分析的自动化 第一节 核酸通论 *第二节 核酸的结构 *第三节 核酸的物理化学性质 第四节 核酸的研究方法 本章小结 核酸的种类、分布 核酸的生物学功能 核苷酸的结构特点 共价结构—(mRNA、 tRNA） 高级结构---DNA、 tRNA二级 酸碱性质 紫外吸收性质- （相关名词解释） 变性、复性 * 这种水解性能上的差别，与RNA核糖基上2′-OH的羟基参与作用有很大的关系。在RNA水解时，2′-OH首先进攻磷酸基，在断开磷酯键的同时形成环状磷酸二酯，再在碱的作用形成水解产物。若加温至1000C，4个小时也可得到小分子的寡聚脱氧核苷酸。 * 这种水解性能上的差别，与RNA核糖基上2′-OH的羟基参与作用有很大的关系。在RNA水解时，2′-OH首先进攻磷酸基，在断开磷酯键的同时形成环状磷酸二酯，再在碱的作用形成水解产物。若加温至1000C，4个小时也可得到小分子的寡聚脱氧核苷酸。 * 这种水解性能上的差别，与RNA核糖基上2′-OH的羟基参与作用有很大的关系。在RNA水解时，2′-OH首先进攻磷酸基，在断开磷酯键的同时形成环状磷酸二酯，再在碱的作用形成水解产物。若加温至1000C，4个小时也可得到小分子的寡聚脱氧核苷酸。 * 这种水解性能上的差别，与RNA核糖基上2′-OH的羟基参与作用有很大的关系。在RNA水解时，2′-OH首先进攻磷酸基，在断开磷酯键的同时形成环状磷酸二酯，再在碱的作用形成水解产物。若加温至1000C，4个小时也可得到小分子的寡聚脱氧核苷酸。 * 这种水解性能上的差别，与RNA核糖基上2′-OH的羟基参与作用有很大的关系。在RNA水解时，2′-OH首先进攻磷酸基，在断开磷酯键的同时形成环状磷酸二酯，再在碱的作用形成水解产物。若加温至1000C，4个小时也可得到小分子的寡聚脱氧核苷酸。 * * 由于核酸分子中的磷酸是一个中等强度的酸，而碱基呈现弱碱性，所以核酸的等电点比较低。RNA的等电点比DNA低的原因，是RNA分子中核糖基2′-OH通过氢键促进了磷酸基上质子的解离。DNA没有这种作用。由于静电作用，溶解度比较低 当核酸分子内的酸性解离和碱性解离相等,本身所带的正电荷与负电荷相等时,此时核酸溶液的pH值即为核酸的等电点p * 天然DNA分子在热变性条件下，双螺旋结构破坏，碱基暴露，在紫外光260nm波长处的吸收度明显增加，此现象称为增色效应。 * 但分子中的共价键磷酸二酯键并没有破坏，分子量也不改变。改变的是