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切花菊组织培养及快速繁殖初代研究 　　摘 要：以带腋芽的茎段、幼花蕾为外植体，在MS培养基上进行初代培养。结果表明：茎段腋芽分化率最高的为培养基MS+BA 2.0+NAA0.2，而花蕾诱导分化率最高的培养基为MS+BA3.0+NAA0.1；培养45d后，愈伤组织块的直径超过1.0cm；丛生芽数达到了11个以上。 　　关键词：切花菊；组织培养；快速繁殖 　　菊花（chrysanthemum morifolimum）原产我国，属于菊科多年生宿根草本植物，是我国十大传统名花之一，也是世界“四大鲜切花”之一。随着现代城市的协调发展，人们对城市环境的要求越来越高，城市的园林绿化、美化水平直接影响到人们生活质量和生活水平。菊花作为园林花卉重要材料，它的需求也日趋增加。小菊是当今花卉市场流行的优良切花菊品种之一，其花小分枝多且花色俱全、花期长、用途广泛、耐运耐贮等特点，深受人们的喜爱。生产上大多数采用脚芽扦插法，不仅繁殖系数低、周期长，而且病菌感染严重和品质退化。利用组织培养技术，可在短时间内繁殖获得大量优质花苗。菊花组织培养快速繁殖技术，国外Ben-Joacov等最早（1972）进行了研究。Earle等又研究了细胞分裂素、生长素不同水平对其生长的影响。国内裘丈达（1982）和唐巍（1993）又开展了这方面的工作，这为切花菊批量生产开辟了一条新途径。本文旨在采用生物技术快速繁殖优良品种并将实验结果推向市场，为大批量生产提供重要参考依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　供试材料选自商丘市花卉生产基地的植株，选取生长健壮、无病虫害的1年生中上部带腋芽的茎段、幼花蕾。 　　1.2 方法 　　1.2.1 外植体准备。将采集的带腋芽的茎段、幼花蕾作为外植体，去掉部分叶片及花蕾上的鳞片，用小毛刷仔细地洗刷，再用洗衣粉溶液浸泡10min，在流水中冲去粘附在上面的污物30min，再用无菌水冲洗2～3次，装入烧杯内，在接种室内放入75%酒精中浸泡30s，而后置于滴入2～3滴吐温-80的0.1%HgCl2溶液中浸泡8min，最后再用无菌水冲洗4～5次，放在无菌滤纸上吸干表面上水分,以备后用。 　　1.2.2 具体操作。整个接种操作过程是在接种室的无菌环境条件下进行，在超净工作台（接种前超净工作台应提前打开并用紫外灯灭菌）的表面，用75%酒精溶液喷洒灭菌，稍等片刻，点燃酒精灯再开始接种。用预先灭过菌的镊子、解剖刀或剪子将其带腋芽的茎段在培养皿上切成1～1.5cm花蕾剥去鳞片后纵切成两半,把镊子放在75%的酒精溶液中蘸一下，并在酒精灯上灼烧。接种时，培养皿的瓶口倾斜对准酒精灯火焰的方向，距离要适当。接种时动作要迅速，封口要扎紧。接种用的镊子每用1次灭菌1次，操作者必须穿上工作服，戴上口罩及帽子，并做好全身消毒。 　　1.2.3 愈伤组织的诱导与分化。将外植体材料置于不同处理的培养基配方中，具体配方及接种材料情况见表1。共设6个处理，每处理6瓶，其中带腋芽的茎段与花蕾各3瓶，每瓶2块材料，重复3次。培养皿为100ml三角瓶，上述各培养基蔗糖3%，琼脂0.8%，pH值5.8。接种后将培养基在培养室内培养，温度为25℃±2℃，每天光照时间为8～10h，光照强度为1800Lx。外植体培养7d后，带腋芽的茎段已开始萌动，21d后其上萌发许多绿色小芽同时在其切口处（生物学下端）肉眼可以看到浅绿色致密的愈伤组织。而花蕾则在21d后才出现愈伤组织，继续培养42d后愈伤组织的直径＞1cm以上，同时萌发出许多连座状的丛生芽。 　　2 结果与分析 　　2.1 不同处理培养基配方对带腋芽的茎段愈伤组织、丛生芽诱导分化的影响 　　初代培养时，不同处理培养基对带腋芽茎段发生的数量及丛生芽的生长势等影响是不同的（见表2），带腋芽的茎段在接种7d后就萌动生长，而且速度较快，伴其生长继续培养14d后，发现茎段切口处已形成愈伤组织，同时腋芽的幼芽叶腋间开始发生绿色小芽，之后渐渐形成丛生芽。由表2可以看出，W5对茎段腋芽分化率发生的效果最好，分化率达83.3%。腋芽分化率与培养基6-BA的质量浓度呈抛物线关系，BA的浓度过低过高均不利其腋芽分化；而NAA的浓度从0.1提高到0.2时，腋芽分化率有上升趋势。在生长势上表现有所加快，但长势弱；在不加任何激素情况下，只利于生长而不利于愈伤组织分化形成丛生芽。 　　2.2 不同处理培养基配方对花蕾诱导分化的影响 　　初代培养中，花蕾形成的愈伤组织时间较晚，接种后21d才能用肉眼看到浅绿色的愈伤组织出现，继续培养35d后愈伤组织逐步膨大，同时上面形成突起状的绿色小芽体，到45d后愈伤组织已膨大达1.2cm左右，并萌发出许多丛生芽，在不同处理培养基配方的激素浓度种类不同时，愈伤组织发生的大小、丛生芽数、生长势是不一样的。 　　从表3可以看出，NAA