基因座控制区元件HS、HS对β-珠蛋白基因表达调控的研究.docVIP

基因座控制区元件HS2、HS3对β-珠蛋白基因表达调控的研究 , , .? , ? ./., 一 , ?. ., .. . . . . 一 ? ? 一. . .. .’. ,., ,, ,.,’,. , , ,, ,. , ’, ,.’ . ? ’. 上海第二医科大学博士论文 ???????????????????????????????????????????????????????????????一一 . , ,/ ,, , ‘ , . ./, . .. . / ... . 一 ,,,也? , .% .% .% .%...%% .%: . % .%.一 ,. . . /、、 上海第二医科大学博士论文 ?????????????????????????????????????????????????????????????一 一 ,,.、、 一 ,/、/、//、 . . / / ,?.%.. , , . ,, // / , . , , , , ,,. . ? . ?. .% .%,.%,.%,.%,/只 / // //.. . ,. ,?, .,.,: .,. . / . . 、 . ,. .. 。 . ., ? ? .. ? 上海第二医科大学博士论文 ????,??????????????????????????????????????????????????????????????????????????一 一 . / . , . ? ? .// ,. ., ?. , . . . , ,..一?,. //? . ? .一, . ? ?. . . 一, . . ? . ..,?, , . ? ..上海第二医科大学博士论文 . ? 斗 ., . : ? ::;;;一;;;上海第二医科大学博士论文 基因座控制区元件、对一珠蛋自基因表达调控的研究 引言 珠蛋白基因是人类基因组中最早被克隆测序的基因,也是最富代表性的基因 之一。人类珠蛋白基因分为、簇,其中~珠蛋白基因簇位于号染色体短臂 上,排列顺序为’一
一唧一脚一一一一’,伴随个体从胚胎到成人的发育过程中, 一珠蛋白基因簇也是按这个顺序表达的,即
基因在胚胎期表达,到胎儿期逐渐 关闭,研、基因逐渐开启;到成年期,基因趋向不完全关闭;同时基因表达 量增高,出生一年后,主要表达基因“。珠蛋白基因表达的发育阶段及红系组 织特异性,使其成为研究真核基因表达调控的极好材料。 珠蛋白基因表达调控是一个精确的复杂的网络系统,需要顺式作用元件、 反式因子及染色质结构等多种因素的协调作用。在顺式元件中,位点控制区 ,对珠蛋白基因组织及发育阶段特异性表达具十 分重要的作用。位于珠蛋白基因簇上游较远处,长约,具红系增强子 及开放染色质结构活性。在转基因鼠研究中,可保证与其相连转基因进行组 织特异性表达,且不依赖整合位点,表达量仅与拷贝数有关”’?。由个 型酶 高敏感位点一 ,组成,各 位点具有不同的功能,它们的功能是很复杂的,不同的实验室利用不同的研 究模型细胞水平或个体水平可能会得到不同的结果。 人们通过构建一些含单独的位点或几个组合位点的珠蛋白基因表达 载体,通过细胞转染及转基因小鼠,研究各位点的功能,也可以通过 小鼠进行研究。经过研究发现,。、。是活性的重要组成部分,。具 典型增强子活性,无论在细胞水平还是在个体水平,都表现出明显的增强予活性, 并可能对各珠蛋白基因的发育阶段特异性表达具重要作用。如,含一?重 组体的转基因小鼠中,可保证、一珠蛋白基因进行组织及发育阶段特异 性表达,表现在胚胎期表达一珠蛋白,在月及成年期表达等量的一珠蛋白”’。 而在含整个一珠蛋白基因簇的酵母人工染色体上缺失位点,由此得到 的转基因小鼠中,、及一珠蛋白基因的发育阶段特异性表达并不受影响, 只是它们的表达量稍有下降,表明的功能可能被其他元件代偿“。但是,上海第二医科大学博士论文 核心序列,导致
、.及口一珠蛋白基因 的报道却表明,缺失 表达明显下降,且其他位点也不能形成。。此外,等利用类似的重组体 还报道,还有开放染色质结构的活性,可以克服位置效应的影响。。用 小鼠,又得到另外一种不同的结果,等“”报道,缺失的 小鼠中,胚胎期基因正常表达,但是成年型的一珠蛋白水平下降%,这 种现象到底是由于对成年期一珠蛋白的表达起重要调控作用,还是由于 或距一珠蛋白基因距离最远的缘故,目前尚不清楚。因此表明,元件 除具有增强子功能外,对于其他功能,目前尚没有统一定论。 对于元件的功能,也采取了同样的研究方法。的功能也同样引起人 们的注意。在稳定整合情况下,有增强子及开放染色质结构的活性,而在瞬 时转染中,其功能报道不一。等人“的研究表明,在胚胎时期可明显