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Snail在大肠肿瘤组织中表达及其意义 　　[摘要] 目的 探讨Snail蛋白表达在大肠癌的发生发展中的作用及意义。 方法 用免疫组化方法检测145例大肠石蜡标本的Snail表达。病例包括大肠炎25例、腺瘤40例、腺癌40例、转移性腺癌40例。 结果 依大肠炎、腺瘤、腺癌、转移性腺癌的次序，Snail阳性表达率分别为16.0%、67.5%、75.0%、95.0%，其中大肠炎组分别与其他三组比较，差异有统计学意义（P 0.05）；腺瘤组和腺癌组分别与转移性腺癌组比较，差异有高度统计学意义（P 　　[关键词] 大肠肿瘤；Snail；转移 　　[中图分类号] R730.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）08（c）-0009-04 　　结直肠癌（大肠癌）是常见的恶性肿瘤之一，其发病率及病死率有逐年增高的趋势，死因多是因为转移，但大肠癌的侵袭和转移机制还未完全清楚[1-2]。上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）是一种基本的生理现象。癌细胞发生上皮间质转化后丧失上皮细胞紧密连接等特性及获得间质细胞迁移运动等特性，从而具备侵袭转移能力[3-5]。研究表明Snail是EMT相关基因如E-钙黏蛋白（E-Cadherin，E-cad）等的核心转录抑制因子，可直接引起包括结直肠癌、胃癌、乳腺癌、鳞状上皮细胞癌等在内的多种肿瘤发生EMT及侵袭转移[3-5]。有报道Snail在结直肠癌中高表达[5-7]，但是相关研究较少，Snail在大肠癌中的表达率不尽一致及其生物学意义、诊断价值等还有待更多病例的观察。本研究旨在探讨Snail表达在大肠癌发生发展中的作用及其辅助诊断价值。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本来源及处理 　　从顺德区中医院收集病理标本，时间为2010年1月～2012年12月，共收集石蜡包埋标本145例，其中慢性大肠炎25例，大肠腺瘤40例，未发生转移大肠癌40例，已有局部淋巴结或远处转移大肠癌40例。标本以4%中性甲醛固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，备用。 　　1.2 免疫组化步骤 　　采用免疫组化试剂盒说明书介绍的方法。石蜡组织切片4～6 μm，贴片于多聚赖氨酸处理的载玻片，在60℃烤箱中烤 ；组织切片常规脱蜡及水化；用0.01 mmol/L柠檬酸缓冲液在高压锅中进行抗原修复；PBS冲洗3次后滴加3%甲醇-过氧化氢，在室温孵育15 min，以阻断过氧化物酶；预冷PBS冲洗后，滴加山羊血清，在室温孵育20 min，甩去多余血清，不用冲洗；滴加1∶100稀释的兔抗人Snail蛋白多克隆抗体（Abgent，Cat：AP2054a），在4℃冰箱孵育过夜，用预冷PBS洗3次，每次5 min，滴加生物素标记的第二抗体，在室温孵育15 min；用预冷PBS洗3次，每次5 min，滴加链霉素亲生物素蛋白-过氧化物酶溶液，在室温孵育15 min；用预冷PBS洗3次，每次5 min，滴加DAB显色剂，在室温下避光显色3～10 min（在显微镜下控制显色时间）；用蒸馏水洗涤及苏木素轻度复染，自来水返蓝15 min，晾干，中性树胶封片。链霉素亲生物素蛋白-过氧化物酶溶液、生物素标记的第二抗体、DAB显色剂等均属于SP9000通用试剂盒（北京中杉生物技术有限公司）的组分。以PBS代替一抗作空白对照，以已知Snail阳性的宫颈癌组织作阳性对照。 　　1.3 阴、阳性反应判定标准 　　空白对照的细胞不显色（-），阳性对照的细胞细胞质和胞核着黄色、棕黄色或棕褐色。淡黄色为弱阳性（+），棕黄色或棕褐色为强阳性（++）。阴/阳性病例判断由两人分别独立对染色的组织切片进行双盲评判。每一组织片随机选择5个视野（100×），在显微镜（400×）下计数每个视野100个上皮细胞或肿瘤细胞中阳性细胞的比例，取5个视野的平均百分数为判定结果。阳性细胞百分比 0.05），而这两组分别与转移性大肠癌组比较，差异有高度统计学意义（P 　　2.3 Snail阳性表达与大肠肿瘤临床病理特征的关系 　　结果显示，Snail阳性表达率与性别、年龄（≤ 60及 60岁）、肿瘤组织分化程度等无关。Snail阳性表达率在浸润至浆膜外者比浸润至浆膜内者升高，但未能检出显著性。直肠癌的Snail阳性表达率为100.0%，比结肠癌的67.4%显著升高。Snail阳性表达率在有转移（包括淋巴结和远处）大肠癌中为94.3%，比无转移大肠癌的64.9%显著是高。Snail阳性表达率随着临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期升高而显著升高，分别为50.0%、62.1%、93.1%、100.0%。见表2。 　　2.4 Snail阳性表达对大肠肿瘤的辅助诊断的敏感性和特异性 　　根据公式计算Snail阳性表