外文翻译在酪乳杆菌BL23的LDH基因分析乳酸生产上的作用.docVIP

英语外文翻译作业 外文资料翻译译文： 在酪干乳杆菌BL23的LDH基因分析：乳酸生产上的作用 Juan Rico · María Jesús Yebra · Gaspar Pérez-Martínez · Josef Deutscher · Vicente Monedero 收稿日期：2007年12月21日/接受日期：2008年1月13日/发表时间：2008年1月30日 ?学会工业微生物2008 摘要：干酪乳杆菌是一种通过通过L-乳酸脱氢酶（LDH1）的作用促使糖发酵主要生产L-乳酸的乳酸菌。此外，D-乳酸的异构体的少量产生一个D-hydroxycaproate脱氢酶（HicD）的活动。LDH1是主要的L-乳酸生产酶，但突变它的基因并没有消除L-乳酸的合成。一项称作 “干酪乳杆菌基本法第二十三条草案的基因组序列”的调查揭示了相关的另外三个基因编码乳酸脱氢酶旁系。为了研究这些基因对全球的这种微生物的贡献，个体乳酸以及双突变体（LDH1 LDH2，LDH1 LDH3，LDH1，LDH4和LDH1hicD）的生产，构建了乳酸生产的上清培养评估。 LDH2，LDH3和LDH4基因乳酸生产中发挥的作用不大，因为他们的单一突变或在组合与LDH1缺失突变对L-乳酸合成的影响很小。ΔLDH1突变体显示D-乳酸产量增加，这是可能通过活动HicD合成，因为它是在取消ΔLDH1 hicD的双突变。相反，可能是HicD，在没有LDH1，LDH2，LDH3或LDH4活动的情况下通过酶谱分析检测。此外，这些检测发现存在额外的频段表现出D-/L-lactate脱氢酶活性，这不能归咎于任何所描述的基因。这些结果表明，L-BL23具有一个复杂的酶系统，能够减少乳酸丙酮酸。 关键词：干酪乳杆菌、乳酸菌、Hydroxycaproate脱氢酶、乳酸脱氢酶、代谢工程 简介：糖代谢乳酸菌（LAB）的特点是通过乳酸脱氢酶的作用主要发酵生产乳酸产品，从而降低丙酮酸，乳酸。从生物技术的观点来看乳酸的生产是非常重要的，因为它可以产生许多自然发酵的实验室资源，它可以用在食品，制药和生物聚合物产业[7]。在乳酸菌干酪BL23，一些菌株已被广泛用于遗传，生理和生化研究，这两个基因编码的蛋白质乳酸脱氢酶活性已被描述[8，12，19]。 LDH1基因编码合成的L-LDH，而hicD编码一个D-hydroxyisocaproate提供了D-乳酸脱氢酶。在这种细菌[19]上与突变株相关的L-乳酸和D-乳酸的形成表明突变株已在这两个基因上建成。然而，干酪乳杆菌BL23显示LDH1突变体仍然产生大量的L-乳酸D-乳酸。一个与其他实验室删除LDH基因相似的行为也有报道。在这个意义上说，基因突变从植物乳杆菌的L型和D型上开始编码，使该生物体产生50％的D型跟50％L型的混合物，从来没有导致乳酸生产[3]的完全缺失。 1乳酸乳杆菌sakei的突变，在缺乏D-乳酸脱氢酶活性酸菌的条件下，将导致具有强烈降低L型和D型的乳酸的菌株生产（D异构体在消旋活动的作用下能够转换成L Dlactate）但仍然产生少量的乳酸[15]。最后乳酸菌的发酵在ldhL 、ldhD双基因剔除的情况下仍然能够合成乳酸[1]。 EVorts已作出建设在一个aVected或乳酸菌菌株上的几个的identiWed LDH基因，因为它们可以用在通过非消旋，光发酵等途径生产活性乳酸[1]。此外，代谢工程战略应用于NADH氧化再加上一个替代的丙酮酸的代谢，导致附加代谢产物的产生[4，6，13，17]。然而，已知的缺失乳酸脱氢酶基因的结合酶活性的表达并不总是能够降低丙酮酸suYcient改道对其他分子比如signiWcant丙酮酸XOW乳酸diVerent的影响。由于这些原因，一个更好的涉及乳酸合成酶的研究将成为必要。在尝试探索的基因负责残留在干酪乳杆菌乳酸生产BL23的LDH1突变体，我们探索其是否存在额外的LDH基因突变以及在eVects乳酸生产上新发现的LDHs的基因组。 材料和方法： 菌株和生长条件： 在这项研究中干酪乳杆菌菌株的使用在表1中列出。他们生长在MRS培养基（Oxoid公司）或MRS基本培养基中，每公升含：蛋白胨10克，肉类提取物8克，酵母提取物4克，吐温80，1毫升，K2HPO42克;柠檬酸铵2克; MgSO4.7H2O，0.2克;MnSO4.4H2O，0.05克，并辅以0.2％（W / V）葡萄糖，在37℃下静置。大肠杆菌DH5α是作为一个克隆宿主，在LB培养基中37℃条件下搅拌生长，对于选择干酪乳杆菌的转化体，将5克/毫升的红霉素加入培养基中。氨苄青霉素则用在100克/毫升大肠杆菌中。 质粒和突变株的构建： pRV300质粒[11]用于兴建综合载体内部碎片的L.casei，LDH2，LDH3，LDH4。一个519