流感病毒分离鉴定.pptVIP

流感病毒的分离鉴定 1、血细胞凝集实验 2、血细胞凝集抑制试验 目的：熟悉病毒血凝、血凝抑制试验的方法及其应用。 原理：流感病毒颗粒表面有血凝素,具有使鸡、豚鼠等血细胞凝集的能力。把一定浓度的鸡红细胞加到待检的鸡胚尿囊液或羊水中，如出现血细胞凝集现象，即表示有病毒存在；如血凝阳性，则可进一步用血凝抑制试验进行病毒鉴定，流感病毒的血凝性，可被免疫血清中的特异性抗体所抑制，使其失去凝集作用，借此可用已知抗体鉴定未知病毒及病毒的型、亚型。 实验材料 (1)接种流感病毒的鸡胚。 (2)质量分数为0．5％的鸡红细胞悬液。 (3)流感病毒型与亚型免疫血清。 (4)碘酒，酒精消毒棉球。 (5)灭菌的镊子、剪刀。 (6)无菌小试管，毛细滴管，吸管。 (7)生理盐水。 (8)试管、试管架。 实验方法： 1、血细胞凝集实验 (1)收获尿囊液：鸡胚孵育3d后,放4度冰箱过夜,次日取出鸡胚,消毒气室端卵壳,用小镊子在无大血管处撕破卵膜,以无菌毛细管吸取尿囊液,放入无菌试管中。 (2)取尿囊液0．1mL,作1：10稀释。 (3)取10支小试管，按给各管加入生理盐水0.2mL。 (4)取1：10稀释的尿囊液0．2mL，加人第1个试管中，混匀后，再吸出0．2mL加入第2个试管中；混匀后，从第2个试管吸出0．2mL加入第3个试管……依次作倍比稀释至第九管，混匀后自第9个试管中取出0．2mL弃掉。这样各管液体量均为0．2mL，从第1-9个试管的尿囊液稀释度为1:20，1:40，…，1:5120，第10个试管为生理盐水对照管。 (5)稀释完毕后加人体积分数为0．5％的压积鸡红细胞悬液，每管0．2mL,室温放置30~60mn。 (6)结果观察 观察时要轻拿、勿摇，首先观察对照管应无凝集，然 后再观察试验管，各管出现的凝集程度以“++++”、“+++”、“++”、“+”、“—”表示，判断标准如下： “++++”：全部红细胞凝集，凝集的红细胞铺满管底，边缘不整齐。 “+++”：大部分红细胞凝集，在管底铺成薄膜状，但尚有少数红细胞不 凝，在管底中心形成小红点。 “++”：约有半数红细胞凝集，在管底铺成薄膜，面积较小，不 凝集的红细胞在管底中心聚成小圆点。 “+”：只有少数红细胞凝集，不凝集的红细胞在管底中心聚成小 圆点，凝集的红细胞在小圆点的周围。 “—”：不凝集，红细胞沉于管底，呈一边缘整齐的致密圆点。 2、血细胞凝集抑制试验 * * 流感病毒血凝试验 结 果 ++++ ++++ ++++ +++ ++ ++ + － － － 摇匀置室温60～90分钟 生理盐水 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 病毒液 (1:10) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 弃0.2 病毒稀释度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 对照 0.5%鸡红细胞 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 ㈠ ㈡ ㈢ ㈣ ㈤ ㈥ ㈦ ㈧ ㈨ ㈩ → → → → → → → → → 结 果 ++++ ++++ ++++ +++ ++ ++ + － － － 摇匀置室温60～90分钟 生理盐水 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 病毒液 (1:10) 0.2 0.2 0.2