第八章 动早期胚胎操作.pptVIP

第六章 动物早期胚胎操作 一、胚胎移植技术 二、胚胎分割技术 三、嵌合体技术 四、细胞核移植技术 第一节、胚胎移植技术 一、胚胎移植的概念及生理基础和原则： 概念：借助一定的器械，从一头优良雌性动物的输卵管或子宫内取出早期胚胎，移植到另一头处于相同生理阶段的雌性动物的相应部位，使之继续发育成为新个体。即借腹怀胎。 供体：提供胚胎的个体，一般为良种。 受体：接受胚胎的个体，提供胚胎孕育时间和空间。 胚胎移植的意义 1. 充分发挥优良母畜的繁殖潜力，加快优良品种的改良。对牛羊等繁殖力较低的优良品种来说，结合人工受精技术可克服其产仔数和世代间隔的限制。 2. 体外受精、胚胎嵌合和核移植等技术都必须通过胚胎移植获得活体。 3. 结合胚胎冷冻可长期保存珍贵遗传资源，并且方便它们的运输。 一）胚胎移植的生理学基础 成年母畜卵巢上存在数千到上万个卵泡，在外源激素作用下，每个发情期的卵泡发育和排卵数可达十数个 每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育 早期胚胎处于游离状态 胚胎发育不存在免疫问题 胚胎发育到一定阶段会与子宫发生生理和组联系 胚胎的遗传性不受受体的影响 二）胚胎移植的基本原则 胚胎移植前后所处的环境的同一性 供体和受体在分类学上的相同属性。 动物生理上的一致性：受体和供体在发情时间上的同期性。 动物解剖位置上的一致性：空间环境的一致性 胚胎发育的期限：胚胎日龄不能超过周期黄体的寿命。 胚胎的质量：胚胎必须是正常的，并在处理过程中不受不良因素的影响。 二、胚胎移植的技术程序 1.供体和受体的选择 2.供体的超数排卵处理 3.同期发情处理 4.供体早期胚胎的收集 5.胚胎的检查 6.胚胎的保存与培养 7.胚胎的移植 8.供体和受体的术后观察 一）供体和受体的选择 供体应具有相当高的育种价值 供体生殖机能应处于较高的状态：无生殖系统疾病，体质强健 受体应容易购买，繁殖性能好，对地方适应性强，体型中上等，非优良品种 受体健康状况良好，已进入发情季节 供受体发情时间应接近或一致 二）供体的超数排卵处理 超数排卵： 雌性动物间情期内，注射外源促性腺激素，诱发其卵巢上大量卵泡发育并排卵的方法称为超数排卵 超排原理： 外源激素可以改变卵巢上只有一个或少数卵泡成熟排卵的定势，解除单胎动物优势卵泡发育对同一拨其他卵泡发育的抑制作用，促使同一拨卵泡群中大部分卵泡能够发育成熟并排卵。 动物常用超排激素： PMSG、FSH、LH、PGF2α、GnRH、hCG等 超数排卵的意义 采用超数排卵可大大增加每次的排卵数量 在科研上可以在短时间内取得大量的卵和胚胎，可以满足胚胎工程研究、遗传工程研究和建立胚胎库的需要。大大缩短了研究周期 在生产中，可以提高优秀动物的繁殖数量，提高产量，增加经济效益。 超数排卵方法 1.小鼠的超数排卵 腹腔注射PMSG 10U，一般选择在中午注射，间隔48小时后注射HCG，光照周期保持12～14h， 2.牛的超数排卵 1）促卵泡素(FSH)减量注射法：供体牛在发情后的9～13d肌注FSH，早晚各一次，间隔12h，分4d减量注射。在第3d时同时宫注PGF2α2.0～2.4mg或氯前列烯醇0.6mg。如使用国产FSH总剂量为325单位时，处理方法如附图所示。超排剂量根据不同厂家激素确定适宜剂量，国产激素320～360单位，进口激素28～36mg。 牛超数排卵示意图 2）.PMSG法 孕马血清促性腺激素(PMSG)处理法 在情期的11～12d，一次肌注PMSG2500～30001U，48h后宫注PGF2α2.4mg。发情后约18h肌注等量的抗PMSG。 发情观察和配种 PGF2α处理后40～48h，大部分处理牛发情。通常要求从注PGF第2d傍晚开始观察发情，至少早晚各观察一次。在观察到接受爬跨后4～6h进行第一次输精，间隔12h后第二次输精。每次有效精子数不得少于50×106，输入两侧子宫角或子宫体。注意输精时不得触摸卵巢。 3.羊的超数排卵 可采用牛的超排处理方法，FSH减量注射或PMSG + PGF2α法。 也可采用如下方法： 每日肌注孕酮10-12mg，连续处理约14d后，一次性肌注PMSG1000—2000IU，1—2天配种。 影响超数排卵的因素： 1. 动物个体状况： 不同个体对激素的敏感性不同 动物的遗传基础的差异 动物的年龄差异 2. 外界环境因素： 季节 光照周期 气候条件及动物营养水平 3. 药物因素：PMSG、FSH等 4. 激素的注射部位及超排程序 四）供体早期胚胎的收集 胚胎的收集是指在配种或输精后的适当时间，从超排供体回收胚胎，以准备给受体移植，简称采胚。 一般将配种当日记为0天，从配