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毛细管电泳法Capillary Electrophoresis, CE陈朵花14109030980 一、概述 generalization 经典电泳分析 traditional electrophoresis 高效毛细管电泳的特点 二、电渗现象与电渗流 electroosmosis and electroosmotic flow 2、分离过程 3. HPCE中电渗流的流形 4 电泳和电渗 电渗流的表示 电渗流的大小可用淌度(μeo)或电渗流系数表示 μeo =υeo / E = l /( teo﹒E ) 电渗流速度 毛细管有效长度 电渗流流出时间 电场强度 5. HPCE中电渗流的作用 6、HPCE中影响电渗流的因素 factors influenced electroosmosis 3. 电解质溶液性质的影响 4. 温度的影响 5. 添加剂的影响  分离效率和分离度 分离效率 柱效可以用理论塔板数n表示 n = (μep+μeo) V l /(2DL) 毛细管电泳分离的柱效方程 理论塔板高 H =L / n n = 5.54(χ/ W?)2 实验上可按上式求出理论塔板数 χ为电泳图上从起点至电泳峰最大值之间的距离 W?为电泳峰的半高峰宽 分离度 三、影响分离效率的因素—区带展宽 factors influenced the efficiency—band broadening 3.焦耳热与温度梯度的影响 4 毛细管壁对组分的吸附 电泳峰拖尾或变形，甚至消失。 抑制吸附作用常用的方法有： ●使用极端pH条件 ●加入中性盐或两性离子化合物 ●对毛细管内壁进行涂层处理 需要注意：方法也会抑制或改变电渗流 二） 毛细管凝胶电泳 CGE 是毛细管自由溶液区带电泳派生出的一种电泳方式 用多孔性的凝胶或其它筛分剂作介质，网状结构，按分子的大小分离 毛细管凝胶电泳综合了电泳技术和平板凝胶电泳的优点 : 电泳峰尖锐，柱效极高 短柱上实现极好的分离 试样容量为10－12g 主要缺点:制备柱较困难，寿命较短 已成为分离分析生物大分子如蛋白质、多肽、核 酸、DNA等强有力的工具。例应用CGE分离与激光诱导荧光检测相结合，用于DNA序列快速分析。 四） 胶束电动毛细管色谱（MECC ，MEKC）micellar electrokinetic capillary chromatography，MEKC 五） 毛细管等电聚焦 CIEF: 建立在不同蛋白质或多肽之间等电点（pI值）差异基础上的分离方法。 蛋白质的等电点(pI): 指蛋白质分子的净电荷数为零时的pH值。 六） 毛细管等电聚焦 capillary isoelectric focusing，CIEF 方法: 进样－等电聚焦－检测 先将脱盐的试样（蛋白质）以≥1％的浓度与两性电解质溶液混合，用压力进样充入毛细管柱(阳极端)，置于阳极电解质溶液如H3PO4中，检测端为阴极端，置于阴极电解质如NaOH中。 施加电压，进行电泳实验。两性电解质离子形成pH的位置梯度，而蛋白质在迁移时会在其等电点的pH区域内停止移动。这样pI不同的蛋白质各组分会在毛细管内很窄的不同pH区域内聚焦. 在阳、阴极电解液中加入盐如NaCI或NaOH,破坏pH梯度，使各组分蛋白质重新带电，在电场力作用下发生迁移、检测，使不同组分的蛋白质得到分离。 六 检测方法 检测器 检出限（mol/L） 特 点 UV－可见吸收 10-5－10-6