普通光学微镜的使用.pptVIP

普通光学显微镜的使用 灵宝市卫生防疫站 刘卫超 概 述 现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。它们由机械装置和光学系统两大部分组成。在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。 概 述 绝大多数细胞都很小，不能用肉眼观察，要借助显微镜来观察。 显微镜的成象原理 光学显微镜是利用光学的成象原理，观察标本结构的。首先利用反光镜将可见光（自然光或灯光光源）反射到聚光器中，把光线会聚成束，穿过生物制片（样品），进入到物镜的透镜上。因此所观察的制片都要很薄（一般为8—10微米厚），光线才能够穿透制片，经过物镜将制片上的结构放大为倒的实象。这一倒的实象经过目镜的放大，映入眼球内最后为放大的倒的虚象 。 显微镜的放大倍数 显微镜放大的倍数是由目镜、物镜和镜筒的长度所决定。镜筒长度一般为160毫米，常用的显微镜，物镜与目镜上都刻有放大倍数（一般目镜越短，放大倍数越高；物镜越长，放大倍数越高），如物镜上刻有10×、20×、40×和90×等；目镜上刻有5×、10×、15×和25×等。物体最后被放大的倍数为目镜和物镜二者放大倍数的乘积。 显微镜的放大效能 显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。要增加数值口径，可以提高介质折射率，显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。 显微镜的光学系统 物镜 目镜 聚光器 反光镜 照明光源 滤光器 盖玻片和载玻片 物 镜 物镜的分类：1 、根据使用条件的不同可分为干燥物镜和浸液物镜；其中浸液物镜又可分为水浸物镜和油浸物镜（常用放大倍数为90—100倍）。 2、根据放大倍数的不同可分为 低倍物镜（10倍以下）、中倍物镜（20倍左右） 、高倍物镜（40—65倍）。 3、根据像差矫正情况，分为消色差物镜（常用，能矫正光谱中两种色光的色差的物镜）和复色差物镜（能矫正光谱中三种色光的色差的物镜，价格贵，使用少）。 物 镜 物镜的主要参数： 放大倍数、数值孔径和工作距离。 1、放大倍数：指眼睛看到像的大小与对应标本大小的比值。显微镜的总放大倍数等于物镜和目镜放大倍数的乘积。2、数值孔径也叫镜口率，简写NA 或A，是物镜和聚光器的主要参数，与显微镜的分辨力成正比。3、工作距离：指当所观察的标本最清楚时物镜的前端透镜下面到标本的盖玻片上面的距离。物镜的工作距离与物镜的焦距有关，物镜的焦距越长，放大倍数越低，其工作距离越长。 物 镜 物镜的分辨力分辨力也叫分辨率或分辨本领。分辨力的大小是用分辨距离（所能分辨开的两个物点间的最小距离）的数值来表示的。显微镜的分辨距离越小，即表示它的分辨力越高，也就是表示它的性能越好。显微镜的分辨力的大小由物镜的分辨力来决定的，而物镜的分辨力又是由它的数值孔径和照明光线的波长决定的。 目 镜 目镜的结构 通常目镜由上下两组透镜组成，上面的透镜叫做接目透镜，下面的透镜叫做会聚透镜或场镜。上下透镜之间或场镜下面装有一个光阑（它的大小决定了视场的大小）。 目镜的长度越短，放大倍数越大（因目镜的放大倍数与目镜的焦距成反比）。 目 镜 目镜的作用 是将已被物镜放大的，分辨清晰的实像进一步放大，达到人眼能容易分辨清楚的程度。 常用目镜的放大倍数为5—16倍。 目 镜 目镜与物镜的关系 物镜已经分辨清楚的细微结构，假如没有经过目镜的再放大，达不到人眼所能分辨的大小，那就看不清楚；但物镜所不能分辨的细微结构，虽然经过高倍目镜的再放大，也还是看不清楚，所以目镜只能起放大作用，不会提高显微镜的分辨率。有时虽然物镜能分辨开两个靠得很近的物点，但由于这两个物点的像的距离小于眼睛的分辨距离，还是无法看清。所以，目镜和物镜即相互联系，又彼此制约。 聚 光 器 聚光器也叫集光器。位于标本下方的聚光器支架上。它主要由聚光镜和可变光阑组成。其中，聚光镜可分为明视场聚光镜（普通显微镜配置）和暗视场聚光镜。 聚 光 器 聚光镜的主要参数 数值孔径（NA ）是聚光镜的主要参数，最大数值孔径一般是1.2—1.4，数值孔径有一定的可变范围，通常刻在上方透镜边框上的数字是代表最大的数值孔径，通过调节下部可变光阑的开放程度，可得到此数字以下的各种不同的数值孔径，以适应不同物镜的需要。有的聚光