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海参糖胺聚糖抗胰岛素抵抗作用实验 　　【摘要】目的探讨海参糖胺聚糖（HGAG）对高血糖小鼠的降糖作用及其对胰岛素抵抗（IR）HepG2细胞糖脂代谢的改善作用。方法采用静脉注射四氧嘧啶（50mg/kg）致小鼠高血糖模型，给予HGAG后，测定小鼠空腹血糖及进行糖耐量试验并计算血糖浓度-时间曲线下面积。以高浓度胰岛素持续刺激HepG2细胞建立IR-HepG2细胞模型，给予HGAG后，分别采用葡萄糖氧化酶法和GPO-POD酶法检测培养液中葡萄糖和甘油的含量，计算葡萄糖消耗量及甘油消耗量。应用MTT法监测细胞存活率。结果与高血糖模型组相比，给予HGAG可明显降低高血糖小鼠空腹血糖及糖耐量试验曲线下面积，并呈剂量依赖性。与IR-HepG2模型组相比，HGAG可明显增加IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量和甘油含量，并呈剂量依赖性。而细胞存活率无显著变化。结论HGAG具有降低高血糖小鼠血糖作用及改善IR-HepG2细胞糖脂代谢的作用。 　　【关键词】海参糖胺聚糖；HepG2细胞；胰岛素抵抗；葡萄糖；甘油 　　糖尿病是影响人类健康的常见病、多发病，研制有效的药物及保健产品以纠正糖代谢紊乱对延缓糖尿病并发症发生、改善患者生活质量及延长生命非常重要。胰岛素抵抗（InsulinResistance，IR）是指胰岛素作用的靶器官对胰岛素作用的敏感性下降，即正常剂量的胰岛素产生低于正常生物学效应的一种状态。目前认为，IR不仅是Ⅱ型糖尿病的发病基础，更是贯穿多种代谢相关疾病的主线，是连结它们的纽带，为这些疾病的共同病理生理基础［1-3］。本研究旨在初步探讨海参糖胺聚糖（holothurianglycosaminoglycan，HGAG）的降血糖作用及改善胰岛素抵抗作用。 　　1材料 　　1.1动物雄性昆明种小鼠，18-22g，清洁级，由大连医科大学提供，辽实动质字［2000］028号。 　　1.2试剂及药品四氧嘧啶（sigma公司），二甲双胍（天津中新药业），HGAG（海晏堂生物有限公司技术部），实验时以生理盐水稀释至所需浓度，现用现配。MEM培养液（Gibco公司），胎牛血清（杭州四季青血清厂），0.25%胰酶、MTT（Sigma公司），胰岛素（Ins）注射液（江苏万邦生化医药股份有限公司），葡萄糖试剂盒、甘油含量测定试剂盒（均购自南京建成生物工程研究所），蒽酮（分析??，国药集团化学试剂有限公司），硫脲（分析纯，天津市凯信化学工业有限公司）。 　　1.3仪器德国罗氏优越Ⅳ型血糖仪及血糖测定试纸（德国罗氏公司），双圈牌MA240D电子秤（上海第二天平仪器厂），TDZ-5WS多管架自动平衡离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司），CO2细胞培养箱（美国ThermoForma），TE2000U倒置相差显微镜（日本Nikon），超净台（上海索谱仪器有限公司），酶标仪（美国Thermo354）。 　　1.4细胞株人肝癌细胞株HepG2由中国医学科学院协和细胞中心提供，接种于含10%体积分数胎牛血清的DMEM培养基中（补充青霉素、链霉素各100UL-1），置于37℃含有5%CO2的细胞培养箱中培养。HepG2细胞呈贴壁生长，采用0.25%胰酶进行消化，每3d传代1次，取对数生长期的细胞用于实验。 　　2方法 　　2.1HGAG对四氧嘧啶致实验性高血糖小鼠空腹血糖的影响 　　2.1.1小鼠高血糖模型建立取雄性，18-22g昆明种小鼠，随机取其中10只为正常对照组。其余按文献方法，略有修改复制高血糖小鼠模型［4-6］：小鼠于禁食（不禁水）16h后，经尾静脉注射四氧嘧啶50mg/kg，稳定15d后测定小鼠空腹5h的血糖值（FBG），FBG10mmol/L的小鼠即为高血糖模型小鼠。 　　2.1.2动物分组及给药如2.1.1项下所述，正常对照组小鼠10只。取高血糖小鼠40只，随机分为高血糖模型组、HGAG高（50mg/kg）、低（25mg/kg）剂量组和阳性对照药二甲双胍200mg/kg组。小鼠分别灌胃给予不同受试药物，正常对照组和高血糖模型组小鼠灌胃给予等容量（0.2mL/10gBW）生理盐水。各组小鼠均每日给药2次（b.i.d.），连续给药4W。 　　2.1.3FBG测定以德国罗氏优越Ⅳ型血糖仪测定各组小鼠给药第7、14、21和28天空腹5h的血糖值（FBG），并记录小鼠体重。 　　2.2HGAG对四氧嘧啶致实验性高血糖小鼠糖耐量的影响小鼠高血糖模型的建立、动物分组及给药方法均同2.1项下所述。各组小鼠于给药第28天以德国罗氏优越Ⅳ型血糖仪测定空腹5h的血糖值（FBG）后，经腹腔注射给予葡萄糖2g/kg，测定葡萄糖负荷后30min、60min、120min和240min血糖值，并按梯形面积法如下式计算糖耐量曲线下面积（AUC）［6］。 　　AU