三萜类醌甲基化合物雷公藤红素的hplcuv和uplcqtof分析研究方法.pdfVIP

三萜类醌甲基化合物雷公藤红素的HPLC-UV 和UPLC-Q-TOF 分析方法及其大鼠体内代谢的研究 三萜类醌甲基化合物雷公藤红素的HPLC-UV 和 UPLC-Q-TOF 分析方法及其大鼠体内代谢的研究 摘 要 雷公藤红素（Celastrol/Tripterine ），别名南蛇藤素，从自卫矛 科植物雷公藤 （Tripterygium wilfordii Hook. f. ）中提取所得，具有 抗炎、免疫抑制、抗癌等多种生物活性，国内外对其药理作用研 究非常之多。本文采用高效液相色谱（high performance liquid chromatogrephy, HPLC ）和超高效液相色谱- 四级杆-飞行时间质谱 （ultra-performance liquid chromatography quadrupole time -of-flight mass spectrometry, UPLC-Q-TOF-MS ），对大鼠尾静脉注射和灌胃 给药后血浆中雷公藤红素的浓度进行测定，并研究了雷公藤红素 在大鼠体内的药代动力学情况，同时对药物在大鼠体内的转化情 况进行了探索。具体分为以下四个部分： 1．建立高效液相色谱-紫外检测器对雷公藤红素进行定性定量 分析的方法，并将其应用于大鼠尾静脉给药后药代动力学研究。 大鼠尾静脉给药后，血浆样品经乙酸乙酯萃取，用Unimicro ODS C18柱(250 mm ×4.6 mm, 5 µm) ，以甲醇- 10%醋酸(92:8 ，v/v)为流 动相进行洗脱，流速为1 mL·min- 1 ，以大黄素为内标，在425 nm波 长下进行检测，测定大鼠血浆中雷公藤红素的浓度。雷公藤红素 的最低定量限为0.0486 µg·mL- 1 ，雷公藤红素在0.0486 ~ 1.62 µg·mL- 1(r = 0.999 3)之间呈良好的线性关系。静脉注射雷公藤红素 (1mg·kg- 1)后的主要药代动力学参数：Cmax=0.48 μg·mL- 1 ，Tmax=5 万方数据 三萜类醌甲基化合物雷公藤红素的HPLC-UV 和UPLC-Q-TOF 分析方法及其大鼠体内代谢的研究 min ，AUC0-τ=23.44 μg·mL- 1 ·min。通过方法学验证，所建立的大鼠 血浆中雷公藤红素浓度的HPLC测定方法灵敏、稳定、准确，并适 用于大鼠体内雷公藤红素的药代动力学研究。 2 ．建立超高效液相色谱- 四级杆-飞行时间质谱定量的方法， 测定大鼠尾静脉注射和灌胃给药后血浆中雷公藤红素的浓度，并 将其应用于大鼠给药后体内药代动力学研究。将大鼠血浆用乙酸 乙酯提取后，以大黄素为内标，用UPLC-Q-TOF 电喷雾负离子模式 对雷公藤红素进行定性定量分析。方法的检测限为4.86 ng·mL- 1 ， 定量限为10.53 ng·mL- 1 ，雷公藤红素在0.024 3 ~ 0.81 mg·L- 1之间呈 良好的线性关系。通过方法学验证，证明该方法稳定准确，能够 用于生物样品的检测。 3 ．将雷公藤红素对照品溶液在合适的色谱、质谱条件下进行 UPLC-Q-TOF/MS/MS分析，通过考察碎片离子情况，参考木栓烷 类五环三萜化合物的质谱裂解有关文献，研究电喷雾正、负离子 模式下雷公藤红素的质谱裂解规律。 4. 利用UPLC-Q-TOF/MS/MS 对大鼠尾静脉给药后体内雷公 藤红素的生物转化、代谢物鉴定进行了初步探索。大鼠尾静脉注 射雷公藤红素后，分别于0 min, 15 min, 5