星型胶质细胞在不同接触状态下 cyclina cyclind1与p27表达研究-expression of cyclina cyclin d1 and p27 in astrocytes under different contact conditions.docxVIP

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2018-06-03 发布于上海
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星型胶质细胞在不同接触状态下 cyclina cyclind1与p27表达研究-expression of cyclina cyclin d1 and p27 in astrocytes under different contact conditions.docx

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星型胶质细胞在不同接触状态下 cyclina cyclind1与p27表达研究-expression of cyclina cyclin d1 and p27 in astrocytes under different contact conditions

C、D和E，Cyclin分子在进化上有高度的保守性，其分子结构上都有一段“Cyclin盒”序列，Cyclin通过与CDK形成复合物发挥调控细胞周期或转录的功能；CDK含量在细胞周期的各阶段相对恒定，其活性由于Cyclin的调节作用有所变化，CDK必须与相应的Cyclin结合，并且在一定部位发生磷酸化或去磷酸化才能有活性或被灭活，Cyclin及其相关分子是目前细胞周期调控研究中的热点。细胞周期负控蛋白（CKI家族）包括P21，P27，P57等，可抑制已知的大多数Cyclin－CDK复合物的激酶活性，对G1期的早期与晚期、S期等各期都有重要作用，且分布与功能在不同的细胞各异，是目前的主要研究对象。为了了解星形胶质细胞在接触抑制时相关的分子机制，我们选取三种细胞周期相关蛋白CyclinA、CyclinD1和P27作为标志物，观察它们在星形胶质细胞增殖和接触抑制过程中的表达情况，探讨接触抑制与细胞周期调控间的相互关系。本研究在体外培养星形胶质细胞的条件下，检测其处于半汇合状态时，以及处于汇合状态时CyclinA、CyclinD1与P27等三种蛋白的表达情况。将纯化的星形胶质细胞进行传代培养，分别在其处于半汇合状态与汇合状态时进行下述实验。一、采用免疫组化染色，将半汇合与汇合的细胞与上述三种蛋白的抗体反应，对结果进行定性分析并行统计学分析。二、采用RT-PCR技术，分别于半汇合与汇合时期检测上述三种蛋白mRNA的表达，将细胞裂解离心制成RNA样品，逆转录成cDNA，产物扩增，对其进行跑胶，显影，并将结果进行统计学分析。免疫组化结果显示：与半汇合时细胞相比，星形胶质细胞汇合时CyclinA表达显著下降（p0.05），CyclinD1表达显著下降（p0.05），而P27表达显著升高(p0.01)；RT-PCR结果显示：与半汇合时细胞相比，星形胶质细胞在汇合时CyclinAmRNA表达显著下降（p0.01），CyclinD1mRNA表达显著下降（p0.05），而P27mRNA表达显著升高(p0.01)。结论：星形胶质细胞在体外培养情况下，细胞处于半汇合状态时，细胞周期正向调节因子CyclinA、CyclinD1高表达，而细胞周期负向调节因子P27低表达，表明细胞处于增殖旺盛期；当细胞处于接触汇合期时，CyclinA、CyclinD1低表达状态，而P27高表达，表明细胞处于增殖抑制期。[关键词]细胞周期；星形胶质细胞；接触抑制；CyclinA；CyclinD1；P27TheexpressionofCyclinA、CyclinD1andP27indifferentsituationsofAstrocytesMasteralCandidate:YingTianxiangSupervisor:Pro.LiuRengangDepartmentofAnatomy，TongjiMedicalcollageHuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan，430030ABSTRACTThephenomenonofcontact-inhibitionplaysanimportantphysiologicalmeaningoncontrollingtheshapesandsizesoforgansandtissuesintheorganismandthenumbersofallkindsofcells.whenthetissuesandorgansgrowsupintosomedegree，theywillstopstogrowbutnottounrestrictedlygrow.Invitroassay，wealsofindthatthecellswillstoptodividewhentheydivideandgrowintosomedegree，arrivingtocol-contact.Butthemechanismofactionofcontactinhibitionisstillunknown.Ingeneral，owingtotheincreasingnumberofcelldissipatedividefactors，orthereleaseorsequestrationofsolublefactorssecretedbucellsatcontact-inhibition.In2001，Nakatsuji’s[1]researchshowsthat:contactdependentinhibitionofcellproliferationismediatedthroughmodulationofcellcyclerelatedproteinexpression，celldensityregulatest