核心考点1基因工程和蛋白质工程.docxVIP

核心考点1　基因工程与蛋白质工程一、要点整合1．掌握基因工程的3种基本工具(1)限制性核酸内切酶：识别特定核苷酸序列，并在特定位点上切割DNA分子。(2)DNA连接酶：①E·coli DNA连接酶只能连接黏性末端；②T4 DNA连接酶能连接黏性末端和平末端。(3)载体：①能在宿主细胞内稳定存在并大量复制；②有一个至多个限制酶切割位点；③具有特殊的标记基因——以便对含目的基因的受体细胞进行筛选。提醒　(1)限制酶≠DNA酶≠解旋酶限制酶是切割某种特定的脱氧核苷酸序列，并使两条链在特定的位置断开；DNA酶是将DNA水解为基本组成单位；解旋酶是将DNA的两条链间的氢键打开形成两条单链。(2)使用限制酶的注意点①一般用同种限制酶切割载体和目的基因。②不同的限制酶也能切割出相同的黏性末端。(3)DNA连接酶≠DNA聚合酶DNA连接酶连接两个DNA片段，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。2．理清基因工程的操作流程(1)获取目的基因的3种途径①从基因文库中获取。②利用PCR技术扩增。③化学方法人工合成。提醒　(1)PCR技术扩增①原理：DNA双链复制。②条件：模板DNA、引物、脱氧核苷酸、热稳定性DNA聚合酶。③过程、(2)化学方法人工合成已知核苷酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板。(2)基因表达载体的构建——重组质粒的构建①基因表达载体的组成②构建过程提醒　(1)基因工程中的载体与细胞膜上的载体不同。(2)启动子、终止子①启动子(DNA片段)≠起始密码子(位于mRNA上)。②终止子(DNA片段)≠终止密码子(位于mRNA上)。(3)目的基因插入位置：启动子与终止子之间。(3)根据受体种类确定基因工程的受体细胞①植物：植物体细胞或受精卵——导入方法常用农杆菌转化法、花粉管通道法、基因枪法(本法针对单子叶植物)②动物：受精卵或体细胞——导入方法为“显微注射法”③微生物：细菌——导入方法为“感受态法”(4)目的基因的检测与鉴定的方法①检测目的基因是否导入受体细胞：DNA分子杂交技术。②检测目的基因是否转录出mRNA：分子杂交技术。③检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原—抗体杂交技术。④个体生物学水平鉴定：根据表达性状判断。3．理清蛋白质工程二、考向设计1．(2017·全国Ⅰ，38)真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中基因A(有内含子)可以表达出某种特定蛋白(简称蛋白A)。回答下列问题：(1)某同学从人的基因组文库中获得了基因A，以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白A，其原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)若用家蚕作为表达基因A的受体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中，不选用__________作为载体，其原因是_________________________________________。(3)若要高效地获得蛋白A，可选用大肠杆菌作为受体，因为与家蚕相比，大肠杆菌具有________________________(答出两点即可)等优点。(4)若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可用的检测物质是________________(填“蛋白A的基因”或“蛋白A的抗体”)。(5)艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是____________________________________________________________________________________________________________________________________________________。2．(2017·全国Ⅱ，38)几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：(1)在进行基因工程操作时，若要从植物体中提取几丁质酶的mRNA，常选用嫩叶而不选用老叶作为实验材料，原因是_________________________________________________________。提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是________________________________。(2)以mRNA为材料可以获得cD