分子杂交 生命科学前沿 教学教材.pptVIP

分子杂交技术;这种方法已成为遗传学和分子生物学等生命学科中 最为普遍和重要的方法之一。;DNA;（一）Southern Blot; 将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。 如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。 ;Nucleic acids have a net negative charge and will move from the left to the right. The larger molecules are held up while the smaller ones move faster. This results in a separation by size.;3，变性;3，印迹转移;B, 电转移法;为使核甘酸固定在膜上， 传统的方法是将膜置于真空烘箱中80℃烘2小时。 在紫外交联仪上仅需在254nm紫外光下照射几秒钟即可。 ;用无关的单链DNA，如小牛胸腺DNA和鲑鱼精子DNA吸附到 膜上的空白处，称预杂交，防止探针被吸附在背景上。;Base pairing indicatesthe gene of interest;杂交;（三）探针标记技术;将基因组DNA经限制性内切酶酶切，进行琼脂糖电泳，把分离后定位在凝胶上的不同分子量的DNA经碱变性处理，将凝胶中变性的DNA转移至一固相支持滤膜。 利用标记的某一DNA、RNA或寡核苷酸与固着于滤膜上的DNA发生同源性杂交，利用放射自显影检测。;是由Southern blot衍生而来。方法是将某种生物的总DNA直接点滴在尼龙膜上，后将膜变性处理，预杂交后，经中和、洗脱、干燥, 进行放射自显影，观察结果。 这种方法是用来初步探测某种生物中含有一种特殊的基因或序列。来分析DNA样品之间的同源性。此法因有假阳性的存在，所以发现阳性斑后还要进一步做Southern blotting加以验证。　;（三）Northern Blot ;原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。 用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。 ;操作过程;3.DNA fingerprinting (指纹) forensics (法医学);DNA collected;结核;初始CD4+T