土壤磷酸酶测定中不同缓冲溶液对显色液吸收波长影响.docVIP

土壤磷酸酶测定中不同缓冲溶液对显色液吸收波长影响 　　摘要：确定了土壤磷酸酶测定时最大吸收波长以及显色时应加入的最佳ｐＨ缓冲溶液。研究结果表明，加入ｐＨ为８．０~１０．０的缓冲液时显色时间快，在可见光区的最大吸收峰在６０４ ｎｍ处，其中以ｐＨ ９．０的吸光度最高，摩尔吸光系数为１．７１７×１０４ Ｌ／（ｍｏｌ?ｃｍ），灵敏度较高。因此确定加入的最佳缓冲溶液ｐＨ为９．０，同时选择６０４ ｎｍ作为最大吸收波长。 　　关键词：土壤磷酸酶；缓冲溶液；吸收波长；ｐＨ；测定 　　中图分类号：Ｏ６５７．３２；Ｓ１５１．９ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）05－0997-02 　　 　　Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Dｉｆｆｅｒｅｎｔ Bｕｆｆｅｒ Sｏｌｕｔｉｏｎ ｏｎ Aｂｓｏｒｐｔｉｏｎ Wａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｉｎ Dｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ 　　Sｏｉｌ Pｈｏｓｐｈａｔａｓｅ 　　 　　ＸＩＡ Ｄｏｎｇ，ＸＵ Ｗｅｎ－ｎｉａｎ，ＺＨＡＯ Ｚｉ－ｃｈａｏ，ＺＨＡＯ Ｊｕａｎ，ＺＨＵ Ｓｈｕｎ－ｂｏ 　　（Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｅｃｏ－ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｉｎ Ｔｈｒｅｅ Ｇｏｒｇｅｓ Ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ Ｒｅｇｉｏｎ， Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ， Ｔｈｒｅｅ Ｇｏｒｇｅｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， 　　Ｙｉｃｈａｎｇ ４４３００２， Ｈｕｂｅｉ， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Tｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｐＨ ｂｕｆｆｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｉｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｉｌ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｈａd ｂｅｅｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｕｆｆｅｒ ｐＨ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ８．０～１０．０ ｃｏｌｏｒｅｄ ｆａｓｔ， ａｎｄ ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｐｅａｋ was ６０４ ｎｍ． Ｔｈｅ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｄｄｅｄ ｔｈｅ ｂｕ??ｆｅｒ （ｐＨ＝９．０） ｗａｓ ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ， ａｎｄ ｔｈｅ ｍｏｌａｒ ａｂｓｏｒｐｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ １．７１７ × １０４ Ｌ／（ｍｏｌ?ｃｍ）． Ｔｈｅ ｓｕｇｇｅｓｔｉｏｎ ｗａｓ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｐＨ ｂｕｆｆｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ９．０， ａｎｄ ６０４ ｎｍ ｗａｓ ｃｈｏｓｅｎ ｉｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｉｌ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： sｏｉｌ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ； bｕｆｆｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ； aｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ； ｐＨ； dｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ 　　 　　土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，可作为反映土壤磷素水平的一项生物指标［１］。目前常用的测定方法为有机基团含量法［２］，但测定时波长的选择上却不一致，分别有５７８ ｎｍ［３，４］、６００ ｎｍ［５］、６６０ ｎｍ［２，６］。同时在吸取土壤滤液进行显色时，加入一定体积的缓冲溶液的ｐＨ值也不统一，有９．０［４］、９．４［２］、９．６［３］。根据这些情况，本研究对土壤磷酸酶测定时不同缓冲溶液对显色液吸收波长的影响进行了研究，并在波长与缓冲溶液的选择中得到最优结果。 　　１ 实验部分 　　１．１ 仪器与试剂 　　１．１．１ 仪器 Ｕ－３０１０紫外－可见分光光度计（日本日立）；１ ｃｍ石英比色皿；５０ ｍＬ容量瓶。 　　１．１．２ 试剂 酚工作液：１ ｇ重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至１ Ｌ，贮于棕色瓶中，取１０ ｍＬ 酚溶液稀释至１ Ｌ（每毫升含０．０１ ｍｇ苯酚）即为酚工作液；氯代二溴对苯醌亚胺试剂：０．２ ｇ氯代二溴对苯醌亚胺溶于１００ ｍＬ无水乙醇中；系列缓冲溶液的配制：ｐＨ ５．０～５．８采用乙酸－乙酸钠缓冲溶液配制，ｐＨ ６．０～７．８采用磷酸盐－柠檬酸盐缓冲溶液配制。ｐＨ ８．０～９．０采用硼酸－硼酸盐缓冲溶液配制，ｐＨ ９．２～１０．０采用硼砂－氢氧化钠缓冲溶液配制。配制方法见文献［２］。 　　１．２ 实验方法 　　吸取１０ ｍＬ酚工作液（０．０１ ｍｇ／ｍＬ）于５０ ｍＬ容量瓶中，分别加入５ ｍＬ上述配制的不同缓冲液，摇匀后加入６滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，３０ ｍｉｎ后用１ ｃｍ 石英比色皿，以试剂空白作参比，在Ｕ－３０１０紫外－可见分光光度计上进行波长扫描，并绘制吸