筛选并确定解淀粉芽孢杆菌B9601-Y2悬浮剂的最佳配方.docVIP

筛选并确定解淀粉芽孢杆菌B9601-Y2悬浮剂的最佳配方 　　芽孢杆菌(Bacillusspp.)能够形成耐热、耐旱、抗紫外线的芽孢,是研制生防菌剂的良好材料。多种解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)菌株因其具有控制植物病害、促进植物生长、提高作物产量等优势,在生物防治制剂中显示出广阔的应用前景。解淀粉芽孢杆菌B9601-Y2(简称Y2,专利号:ZL200310104195.6)是笔者所在实验室从小麦根系土壤分离的一株具有广谱抑菌促生长作用的生防菌株,能有效防治玉米大斑病、小斑病、圆斑病等真菌性病害,促进多种植物插条生根,是一种很好的生物防治制剂,但其制剂较单一,目前仅有可湿性粉剂产品。为克服Y2可湿性粉剂颗粒较大、易于沉降和分散性较差等缺点,笔者筛选并确定了Y2悬浮剂的最佳配方,旨在为其产品的商业化生产提供理论依据。 　　1、材料与方法 　　1.1供试材料 　　供试菌株:解淀粉芽孢杆菌B9601-Y2菌粉,芽孢含量≥1.0×1011cfu/g,芽孢率≥95%;润湿分散剂:烷基萘磺酸缩聚物钠盐(MorwetD-425)、亚甲基双萘磺酸钠(NNO)、聚乙烯醇(PVA)、苯乙基酚聚氧乙烯醚(农乳602)、烷基芳基聚氧乙烯聚氧丙烯醚(农乳34)、聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯(吐温-80)、烷基酚聚氧乙烯醚(OP-10);增稠剂:黄原胶、硅酸镁铝、羧甲基纤维素(CMC);防冻剂:甘油;防腐剂:苯甲酸钠、山梨酸钾、对羟基苯甲酸甲酯;紫外(UV)保护剂:黄原胶、羧甲基纤维素(CMC)、刚果红、淀粉、糊精、尿素、抗坏血酸(VC)、纯牛奶;消泡剂:正辛醇;主要仪器:粉碎机、小型立式砂磨机、旋转粘度计、激光粒度分析仪、台式离心机、恒温摇床等。 　　1.2制剂加工与初始比例 　　将Y2菌粉与一定比例助剂补足水混合均匀后经砂磨机砂磨4h后制成各种不同的悬浮剂。初始制剂成分配比(质量百分数,下同):原粉5.00%、润湿分散剂总计≤10.00%、紫外保护剂0.30%、防腐剂0.30%、防冻剂5.00%、消泡剂0.20%。 　　1.3配方的筛选 　　1)润湿分散剂。采用流点法筛选润湿分散剂品种,试验重复4次。选用对供试原粉流点值较低的润湿分散剂进行下一步试验,按悬浮剂配制方法,配制几个样品,测定样品悬浮剂的各项指标,确定润湿分散剂组合及用量。 　　2)增稠剂。按照配方要求,将粘度调节剂按不同的含量制成样品。将样品经(54±2)贮存14d后,测定各样品的倾倒性、流动性及分层情况。 　　3)紫外保护剂。将保护剂按0.30%比例添加到发酵液中,混合均匀并分别稀释后涂布在LB平板上,置于距离紫外灯40cm处,分别照射30、60、90s后统计存活率。以不加保护剂作对照,每个处理重复4次。保护效能指数=(处理芽孢存活率-对照芽孢存活率)/(100-对照芽孢存活率)。 　　4)防腐剂。以上述配方为基础,加入不同种类和含量的防腐剂,配制不同的样品。将样品经室温贮存14d后,测定产品的悬浮率和霉变程度。 　　5)防冻剂。将筛选出的润湿分散剂、增稠剂、保护剂、防腐剂配制成悬浮剂样品后,添加不同浓度的防冻剂。将样品经(0±2)贮存24h后,测定产品的悬浮率、析水率和分散性。 　　1.4悬浮剂稳定性的测试 　　将试验结果得到的最佳配方制作成悬浮剂样品,分2组装入安碚瓶中,每组5瓶,分别进行冷贮[(0±2)贮存7d]和热贮[(54±2)贮存14d]处理,测定悬浮剂的芽孢含量、悬浮率、流动性、粘度等各项指标。 　　1.5制剂质量指标的测定 　　按照《中华人民共和国国家标准》对解淀粉芽孢杆菌Y2悬浮剂的各项质量指标进行测定。悬浮率测定参照GB/T14825-2006的方法;pH值测定参照GB/T1601-1993的方法;冷贮稳定性测定参照GB/T19137-2003的方法;热贮稳定性测定参照GB/T19136-2003的方法;分散性、倾倒性、持久泡沫量测定参照易敏等的方法;有效成分采用平板菌落计数法测定;粘度采用旋转粘度计测定;颗粒直径采用激光粒度仪测定。 　　1.6数据处理与统计方法 　　应用SPSS19.0对所得试验数据进行统计分析,采用Excel2007进行图表绘制。 　　2、结果与分析 　　2.1润湿分散剂的筛选 　　1)润湿分散剂的流点。在预试验助剂与Y2生物相容的基础上,选择7种生物相容性较好的润湿分散剂,用流点法测定各自流点,比较其润湿分散能力(表1)。润湿分散剂流点越小,表明润湿分散能力越强。 　 　　由表1可知,7种润湿分散剂的流点由小到大依次为农乳34　　2)润湿分散剂配方的优化。根据预试验,样品中的增稠剂、防腐剂和防冻剂分别为黄原胶、对羟基甲酸甲酯和甘油,添加量分别为0.20%、0.10%和5.00%,配制成不同的样品后,测定悬浮剂的悬浮率和分散