igf1r抗体抑制herceptin耐药卵巢癌细胞的机制研究-mechanism of igf1r antibody inhibiting herceptin - resistant ovarian cancer cells.docx

关于学位论文独创声明和学术诚信承诺本人向河南大学提出硕士学位申请.本人郑重声明:所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的，对所研究的课题有新的见解.据我所知，除文中特别加以说明、标注和致谢的地方外，论文中不包括真他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括真他人为获得任何教育、科研机掏的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意.在此本人郑重承诺:所呈交的学位论文不存在舞弊作伪行为，文责自负。学位申请人(学位论文帕签名:圣Jb201年y月/ρ日关于学位论文著作权使用授权书本人经河南大学审核批准授予硕士学位。作为学位论文的作者，本人完全了解并同意河南大学高关保留、使用学位论文的要求，即河南大学有权向国家图书馆、科研信息机梅、数据收集机梅和本校图书馆等提供学位论文(纸质文本和电子文本)以供公众检索、查阅.本人授权河南大学出于宣扬、展览学校学术发展和进行学术交流等目的，可以采取影印、缩印、扫描和烤贝等复制手段保存、汇编学位论文(纸质文本和电子文本L(涉及必威体育官网网址内容的学位论文在解密后适用本搜权书)学位获得者(学(主论文作者)签名:?二儿201年主月/。日学位论文指导教师签名:易放2015年j月10日MECHANISMRESEARCHOFANANTI-IGF-1RMONOCLONALANTIBODYTOINHIBITTHETRASTUZUMAB-RESISTANTOVARIANCANCERCELLSADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByWangWeiSupervisor:MaYuanfangQiaoChunxiaMarch,2015摘要研究背景：卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，死亡率位列各类妇科肿瘤的首位。手术联合化疗能抑制肿瘤发展，但是复发率高。特异性抗体靶向治疗已经成为卵巢癌临床治疗的研究热点，先后有多种抗体进入临床研究，能够抑制疾病进展，具有良好的应用前景。但是，抗体耐药现象明显影响了疾病预后。因此，探讨卵巢癌抗体耐药的分子机制、寻找有效的干预策略具有重要意义。在前期工作中，我们利用抗HER2抗体曲妥珠长期处理敏感细胞系SKOV3，筛选获得一株抗体耐药的细胞株SKOV3-T。基因芯片分析结果显示，SKOV3-T细胞中HER2表达水平降低，而IGF-1R表达显著上调，提示耐药细胞发生了HER2表位逃逸，而IGF-1R信号通路的激活可能与抗体耐药相关。在此基础上，本研究将进一步确定IGF-1R在抗体耐药细胞系中的生物学功能，并尝试利用抗IGF-1R特异性抗体逆转耐药，探索在诱导耐药的过程中细胞发生适应性改变的内在机制。方法：利用流式细胞术、免疫印迹、细胞增殖、克隆形成、体内成瘤等方法，比较SKOV3和SKOV3-T细胞的生物学活性差异。利用真核转染技术在SKOV3中转入IGF-1R全长质粒提高IGF-1R表达水平，同时在SKOV3-T中转入IGF-1R-siRNA慢病毒下调IGF-1R的表达，借助克隆形成、细胞增殖、体内成瘤、细胞内信号等实验，验证IGF-1R在抗HER2抗体耐药中潜在作用。针对IGF-1R筛选获得了一种人源单克隆抗体LMAb1，借助细胞增殖、迁移、克隆形成、体内成瘤、信号转导等方法探讨抗IGF-1R抗体对HER2耐药的逆转效应；进一步，我们还通过流式细胞术鉴定并分选肿瘤干样细胞，利用细胞增殖、克隆形成、体内成瘤以及细胞内信号等指标，初步探索耐药发生过程中肿瘤干细胞适应性改变的分子机制。结果：HER2抗体耐药细胞SKOV3-T的增殖、迁移、克隆形成、体内成瘤能力均明显强于敏感细胞SKOV3；在敏感细胞中过表达IGF-1R使得细胞增殖、克隆形成、体内成瘤能力明显增强，细胞周期S期延长，而在耐药细胞中转入IGF-1R-siRNA慢病毒，降低IGF-1R表达水平，可以引起细胞增殖延缓、克隆形成和体内成瘤能力减弱，表明IGF-1R在耐药细胞系中具有重要的生物学作用，与耐药细胞的增殖和成瘤能力密切相关；进一步，我们制备了IGF-1R抗体LMAb1，实验表明，LMAb1能够特异性的抑制SKOV3-T细胞I增殖、克隆形成、迁移和体内成瘤，提高荷瘤小鼠的生存率。细胞内信号结果显示，抗IGF-1R抗体能够抑制IGF-1R活化，阻断下游MAPK、AKT信号通路，部分逆转曲妥珠耐药；同时，流式细胞术鉴定结果显示，抗体耐药细胞系中干样细胞群比例明显升高，分选获得的干样细胞增殖、克隆形成、体内成瘤能力明显强于非干样细胞，提示在耐药诱导过程中普通肿瘤细胞发生了