hsamir126的表观调控与肺癌的相关性分析-correlation analysis between apparent regulation of h samir 126 and lung cancer.docx

hsa-miR-126的表观调控与肺癌相关性的研究背景：中文摘要我国是肺癌高发的国家，其发病率和病死率都呈上升的趋势，据《2012中国肿瘤登记年报》必威体育精装版统计数据显示，肺癌发病率和死亡率分列男性肿瘤首位，女性肿瘤发病率的第二位和死亡率的第一位，其中80%为非小细胞肺癌（NSCLC）。肺癌早期诊断困难，确诊时绝大部分已失去了手术的机会,化疗是晚期NSCLC患者的主要治疗手段之一。但是化疗耐药往往使得肺癌的治疗效果不佳，生存率并没有得到明显的提高。因此寻找肿瘤标志物一直都是肺癌研究的重要领域。肿瘤标志物在癌症的早期诊断、个体化治疗、预后判断等诸多方面都具有重要作用。我们前期对肺癌MicroRNA表达谱的研究中发现许多MicroRNA异常表达,其中hsa-miR-126的表达低下引起我们的注意，通过生物信息学分析,提示hsa-miR-126的异常表达可能受表观遗传调控的影响，它的异常表达与肿瘤的发生发展有一定的关系。本研究就这个问题展开初步的探索。方法：通过Stem-loopRT-PCR的方法，检测了71对患者肺癌组织标本和正常组织标本hsa-miR-126的表达情况。通过生物信息学分析，发现hsa-miR-126基因上游promotor存在CpG岛，推测它的低表达可能与CpG岛超甲基化有关，采用甲基化特异性基因扩增(methylationspecificpolymerasechainreaction，MSP)和ratio值聚类分析的方法对41对肺癌标本的hsa-miR-126基因启动子上游CpG岛甲基化状态进行研究；最后对肺癌细胞株（A549、NCI-H460）分别用不同浓度的5-杂氮-2’-脱氧胞嘧啶（5-aza-2-deoxycytidine，5-aza-dC）进行脱甲基化处理，用RT-qPCR的方法检测其hsa-miR-126表达量的变化。使用SPSS软件13.0进行统计学分析。71例肿瘤标本因方差不齐者采用秩和检验Wilcoxon，41例肿瘤标本采用聚类分析，P0.05认为差异有统计学意义。结果：71例患者肺癌组织标本比正常组织标本MicroRNA-126的表达情况是下调的，结果具有统计学上的明显差异（P0.05）,41对肺癌标本的microRNA126ratio值聚类图结果显示甲基化程度高的样品占总样品的59%,结果具有统计学上的明显差异（P0.05）,对细胞分别用不同浓度的5-杂氮-2’-脱氧胞嘧啶(5-aza-2-deoxycytidine，5-aza-dC)进行脱甲基化处理后发现其MicroRNA-126的RT-qPCR表达量随着5-aza-dC浓度的增加而增加。结论：本研究发现与正常肺组织相比，hsa-miR-126在肺癌患者标本中呈低表达趋势。甲基化检测和ratio值聚类分析的结果显示hsa-miR-126启动子上游CpG岛甲基化呈高表达状态，对肺癌细胞株(A549、NCI-H460)分别用不同浓度的5-杂氮-2’-脱氧胞嘧啶(5-aza-2-deoxycytidine，5-aza-dC)进行脱甲基化处理后发现其hsa-miR-126的RT-qPCR表达量随着5-aza-dC浓度的增加而增加。从本研究中我们推测肺癌组织中hsa-miR-126的低表达与肺癌的发生可能有关，hsa-miR-126基因上游promotorCpG岛高甲基化可能是它异常表达的重要原因.关键词：非小细胞肺癌；H460；A549；hsa-miR-126；CpG岛；甲基化Studyontheassociationbetweenepigeneticregulationofhsa-miR-126andlungcancerPostgraduate:XuZhiQiangTutor:HeJianXingAbstractBackground:Chinaisacountrywithhighincidenceoflungcancerwhichexhibitsarisingtrendinincidencerateandmortalityrate.Basedonrecentstatisticaldatafrom”2012Chinesecancerregistryannualreport”,incidencerateandmortalityrateoflungcancerarehighestamongmencancersandmortalityratehighestandincidenceratesecondhighestamongwomencancers.Oftheselungcancers,80%isnon-smallcelllungcancer(NSCLC).Earlydiagnosisoflungcancerisdifficultandmostpatient