急性缺氧条件下乳鼠心肌细胞tnfr1表达特点及sirna调控作用-expression characteristics of tnf r1 in neonatal rat cardiomyocytes under acute hypoxia and its sirna regulatory effect.docxVIP

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2018-05-28 发布于上海
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急性缺氧条件下乳鼠心肌细胞tnfr1表达特点及sirna调控作用-expression characteristics of tnf r1 in neonatal rat cardiomyocytes under acute hypoxia and its sirna regulatory effect

目录英文缩略词表及中文对照1中文摘要2材料与方法9结果20讨论34参考文献36第二部分小分子干扰RNA抑制乳鼠心肌细胞TNFR1的表达39材料与方法39结果41讨论44参考文献47综述49声明60致谢61英文缩略词表及中文对照英文缩写英文全称中文名称NRCMNeonatalratcardiomyocytes乳鼠心肌细胞TNFR1Tumornecrosisfactor-αreceptor1肿瘤坏死因子受体1TACETNFαconvertingenzymeTNF-α转换酶MAP3kmitogen-activationproteinkinase丝裂原激活蛋白激酶p38MAPKp38mitogen-activatedproteinkinases分子量为38KD的酪氨酸磷酸化蛋白激酶ASK1Apoptosissignal-regulatingkinase1细胞凋亡信号调解激酶JNKc-JunNH2-terminalkinasec-Jun氨基末端激酶PKCproteinkinaseC蛋白激酶CSOCSSuppressorofcytokinesignaling细胞因子信号抑制物CamKCalcium/calmodulin-dependentproteinkinase钙调素依赖性蛋白激酶MMPMatrixmetalloproteinase基质金属蛋白酶ROSreactiveoxygenspecies活性氧簇急性缺氧条件下乳鼠心肌细胞TNFR1表达特点及siRNA调控作用硕士研究生：刘立新指导老师：陈志坚教授中文摘要第一部分急性缺氧条件下乳鼠心肌细胞TNFR1表达特点目的：探讨急性缺氧条件下，乳鼠心肌细胞（NRCM）肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）表达变化情况。方法及结果：培养原代乳鼠心肌细胞，应用Na2S2O4作为氧清除剂，模拟单个心肌细胞缺氧模型；根据血气分析结果，在培养基中加入不同浓度的Na2S2O4，造成心肌细胞轻、中、重度不同程度缺氧，利用RT-PCR、Western-blot和confocal分别检测心肌细胞TNFR1的表达变化情况。结果显示，在缺氧急性期(3h内)，随着缺氧程度的加重和缺氧时间的延长，心肌细胞TNFR1表达减少，且重度缺氧早期即可出现TNFR1表达明显减少，而轻度缺氧时，TNFR1表达量下降相对缓慢。结论：在急性缺氧条件下(缺氧3h内)，乳鼠心肌细胞TNFR1表达减少。关键词：肿瘤坏死因子受体1；缺氧；乳鼠心肌细胞第二部分小分子干扰RNA抑制乳鼠心肌细胞TNFR1的表达目的：研究siRNA对乳鼠心肌细胞（NRCM）肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）基因沉默作用。方法及结果：根据大鼠基因序列设计，化学合成3条干扰TNFR1基因的siRNA及1条阴性对照siRNA，以Cy3荧光标记，以Lipofectamine2000（Invitrogen，美国）介导转染NRCM，用RT-PCR和Western-blot分别检测TNFR1基因在mRNA和蛋白水平的改变，验证所设计的siRNA的抑制效应。以Lipofectamine2000介导转染NRCM，转染效率大于30%。起始于大鼠TNFR1基因614位点的siRNA有明显的抑制效应，在基因水平下降76.2%（P0.05），蛋白水平下降了75.4%（P0.05）。结论：起始于614位点的siRNA对乳鼠心肌细胞TNFR1有明显的抑制效应。关键词：siRNA；肿瘤坏死因子受体1；乳鼠心肌细胞TNFR1expressioncharacteristicsunderacutehypoxiaandsiRNAregulationofneonatalratcardiomyocytesMasterCandidate:LiuLixinTutorProfessor:ChenZhijianAbstractPartOneTNFR1expressioncharacteristicsunderacutehypoxiaofneonatalratcardiomyocytesObjective:Investigateunderacutehypoxia,theTNFR1expressionchangesofneonatalratcardiomyocytes.Methodsandresults:Cultureprimaryneonatalratcardiomyocytes;Na2S2O4asoxygenscavengers,Simulateasinglemyocardialcellhypoxiamodel;Accordingtothebloodgasanalysisresults,differentconcentrationsofNa2S2O4isaddedtotheDMEMmedium.,resultingintnel