实验室设备及常规技术.pptVIP

3 植物生长调节物质（植物激素） 植物激素是在植物体内合成的，对植物生长发育有显著调节作用的微量有机物，而植物生长调节剂是外源的调节植物生长发育的物质。 无机元素和有机营养构成的培养基仅保证培养物的生存与最低生理活动，只有加入植物生长调节物质，才能诱导细胞分裂、脱分化和再分化。 一般植物生长调节剂母液的配制的终浓度以0.5mg/ml为好，需要注意的是：（１）配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、IBA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。以后者效果好。（２）细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3～4滴1mol/L的盐酸溶解，或直接用1mol/L HCl溶解，再用蒸馏水定容。（３）GA3以95%酒精溶解（不耐高温，过滤灭菌）保存在棕色试剂瓶中。 实验室是细胞工程研究的主要场所，应能满足清洗、培养基制备、储藏、无菌操作、培养、鉴定等多方面的工作。 面积60m2左右，配备的主要仪器设备有 ：冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱以体积180-200L为宜，用于储存培养基母液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材料。天平应有不同感量。  配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。 如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成一个准备间，要求是设备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。 1.4 无菌操作室 主要用于实验材料的接种操作，所以又叫接种室。通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。 室内配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。 1.5 培养室 为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养室的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。天花板和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或瓷砖铺设，一般要分两间，一为光照培养室，一为暗培养室。培养室外应有一预备间或走廊。 培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W，固定在培养架的侧面或搁板的下面，每层有两支日光灯，距离在20cm，光照强度为2000-3000lx。 2.2 温室为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。 注意事项： （1）实验器皿、操作表面、皮肤一般用 70~75%酒精；（2）升汞为剧毒药品，一则使用时注意别溅到皮肤上，二则使用后要进行处理，不能直接导入下水道；  升汞处理方法：  升汞＋Na2S－－－絮状沉淀（至絮状沉淀不再产生为止）－－＋FeSO4（中和过多的Na2S ）（3）长期不用的培养室或接种室要进行熏蒸。方法：甲醛、高锰酸钾熏蒸。   2) 整个接种操作应在近火焰处进行，且动作要迅速. 4) 接种时不得用手接触瓶盖内壁或瓶口 5) 瓶盖朝上放，接种完毕后立即盖好瓶口 6) 接种完一瓶用火烧用具以防止交叉污染产生 7) 种子和分生组织：培养时通常将其贴放在培养基表面，而不是插到培养基内部，以免供氧不足 8) 接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形态学上端露于空气中 用于外植体分离的母体植物材料一般有3种来源： 一是生长在自然环境下的植物； 二是在温室控制环境条件下生长的植物； 三是无菌环境下已经过离体培养的植物。 光质对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。如百合珠芽在红光下培养，2周后，分化出愈伤组织。但在蓝光下培养，几周后才出现愈伤组织，而唐菖蒲子球块接种15天后，在蓝光下培养首先出现芽，形成的幼苗生长旺盛，而白光下幼苗纤细。 离体培养条件下，一般用日光灯进行光照，光谱成分主要是蓝紫光，波长为419-467nm。 对芽分化有效光谱成分为蓝紫光，根