TORCH检测方法讲解课件.pptVIP

TORCH感染检测方法与结果分析 1971 年Nahmias 等首先描述了病原体感染对胎儿的致畸作用，他将数种能引起孕期宫内感染，甚至造成先天缺陷或发育异常的病原体英文名词的第一个字母组合而成“TORCH”，即弓形虫 ( TOX) 、风疹病毒(RV) 、巨细胞病毒(CMV) 、单纯疱疹病毒(HSV)、其他(OTH)。其他病原体感染包括细小病毒（B19）、沙眼衣原体（CT）、解脲支原体（UU）等。近几年人乳头瘤病毒（HPV）、淋球菌（GC）感染率明显上升，也引起学者重视。 孕期TORCH感染通常无症状，但对胎 儿可造成危害，可导致自然流产、胎儿畸 形、死胎、胎儿生长受限（FGR）、早产及 新生儿疾病等严重并发症。虽然TORCH感染 对胎儿、新生儿能够产生不利影响，但经 积极治疗后再次受孕仍可分娩正常婴儿。 因此在孕前监测TORCH 感染，争取在孕前 进行干预，选择适宜的妊娠时机受孕，可 减少不良妊娠结局的发生，对减少先天性 感染儿及病残儿的出生极为重要。 TORCH感染临床检测最常用的方法包括两种： TORCH抗体的检测 TORCH病原体的检测 一、TORCH抗体检测方法与结果分析 1、检测方法 用于测定液体标本中的微量物质，最常用的是免疫标记技术，是指用荧光素、酶、放射性同位素、发光剂或电子致密物质标记抗体或抗原后进行的抗原抗体的反应。这类检测技术的优点是特异、灵敏、快速、能够定性和定量、易于观察结果等。我们实验室检测TORCH抗体采用的方法是酶免疫测定中的酶联免疫吸附试验（ELISA），它是用酶标记抗体或酶标记抗抗体进行的抗原抗体反应。 （1）标本采集和处理 病人无需空腹，通过无菌性静脉穿刺采集自凝血样本2ml，离心后留取血清，最好是新鲜血清用于测定，如不能立即测定可保存于-20℃，不能反复冻融。溶血、高脂血症、黄疸可能影响检测结果。 （2）检测原理 酶联免疫吸附试验（ELISA）是根据酶免疫测定原理发展的一种固相免疫酶技术，目前广泛应用于各种抗原和抗体的检测。ELISA的基本原理是：①抗原和抗体能与固相载体表面结合并保持其免疫活性；②抗原和抗体与酶结合成的标记物，既能保持抗原或抗体的免疫活性，又能保持酶的活性；③受检物中的抗原或抗体与固相表面的抗体或抗原发生免疫反应并结合在固相表面，此抗原抗体复合物又能结合相应的酶标记物 , 用洗涤方法除去未结合而游离的酶标记物，继而加入酶反应的底物后，底物被酶催化为有色产物，显色的程度与受检物中的抗原或抗体的量直接相关，用合适的分光光度计或酶标仪进行比色，根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，一般1分子酶在1min内可催化数十万乃至上千万分子底物变为产物，故可极大地放大反应结果，从而使测定方法具有很高的敏感度。 我们实验室检测抗体的具体步骤是:先将已知的可溶性抗原吸附于某一种固相载体表面，并保持其免疫活性。加入待检血清，患者血清与固相载体表面的抗原接触起反应，如血清中有相应特异性抗体存在，则抗体会与抗原结合在固相载体上，形成抗原—抗体复合物，洗涤去除过多的抗体。然后加入用辣根过氧化物酶标记的抗体复合物，后者将会与抗原—抗体复合物结合。 通过洗涤，洗去未反应的酶标记抗体，这样结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物四甲基联苯胺（TMB）后，底物经酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，用酶标仪进行比色，根据颜色反应的深浅进行定性分析。 2、结果分析 抗体中的IgM和IgG以高浓度遍布全身，是全身性体液免疫反应的主要效应分子。IgM是初次体液免疫应答早期阶段产生的主要免疫球蛋白，主要分布于血液中，抗全身感染的作用较强。IgG是再次体液免疫应答产生的主要免疫球蛋白，在血浆和组织液中各占50%左右，故几乎分布于全身各组织及体液中。IgG是唯一能通过胎盘的免疫球蛋白，故对新生儿抗感染起重要作用。 TORCH感染后，一般首先出现的是IgM，然后才产生IgG，感染后5～6天IgM＞IgG，20～30天IgM达到高峰。感染后4～8周IgG达到高峰，并维持多年至终生。 抗体实验结果解释参考表： IgM IgG 结 果 解 释 － － 从未感染过。易感人群 ＋ － 两周后复查，结果相同， 考