细胞生物学研究方法 教学 讲义.pptVIP

第二章 细胞生物学研究方法;细胞形态结构的观察方法 细胞组分的分析方法 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 用于细胞生物学研究的模式生物 ;第一节 细胞形态结构的观察方法;一、光学显微镜技术;普通光学显微镜 ;????? ;微分干涉显微镜 ;a)under bright-field; b)phase-contrast; c)DIC;荧光显微镜 ;荧光显微镜照片 微管呈绿色 微丝红色 核蓝色 ;激光共聚焦扫描显微镜 ; 激光共聚焦扫描显微镜用激光作扫描光源，由于激光束的波长较短，光束很细，所以共焦激光扫描显微镜有较高的分辨力，大约是普通光学显微镜的3倍。 调焦深度不一样时，就可以获得样品不同深度层次的图像，这些图像信息都储于计算机内，通过计算机分析和模拟，就能显示细胞样品的立体结构。 ;荧光共振能量转移技术;;荧光漂白恢复技术;二、 电子显微镜技术;透射电子显微镜 ;电镜与光镜的比较;主要电镜制样技术;扫描电镜及其图像;扫描隧道显微镜;第二节 细胞组分的分析方法;一、超速离心分离细胞器、生物大分子及其复合物;密度梯度离心;二、细胞内核酸、蛋白质、糖类、脂类的显色;三、特异蛋白抗原的定位与定性;;人类染色体端粒DNA的荧光原位杂交 ;五、放射自显影技术;六．定量细胞化学分析技术;? 流式细胞仪（Flow Cytometry） ?主要应用： 用于定量测定细胞中的DNA、RNA或某一特异蛋白的含量； 测定细胞群体中不同时相细胞的数量； 从细胞群体中分离某些特异染色的细胞； 分离DNA含量不同的中期染色体。 ;第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术;一、细胞的培养;Hela细胞（左）、CHO细胞（右）的培养;植物细胞培养 ; 二、细胞工程 ;细胞融合;正常淋巴细胞具有分泌抗体的能力，但不能在体外长期培养，瘤细胞可以在体外长期培养，但不分泌抗体。于是英国人Kohler和Milstein 1975将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖。;第四节 用于细胞生物学研究的模式生物;大肠杆菌;线虫;斑马鱼;拟南芥