10.3病毒类疫苗（赵会长制作）.pptVIP

10.3 病毒类疫苗 10.3.1 常用病毒类疫苗的生产工艺 * 病毒疫苗的分类 传统疫苗 ： 减毒活疫苗 灭活疫苗 亚单位疫苗 减毒活疫苗是通过不同的方法手段，使病毒的毒力，即致病性减弱或丧失，疫苗由完整的病毒组成。 减毒活疫苗是目前效果最好的疫苗，其特点是由活的病原体组成。活疫苗有可诱发全面的免疫应答反应（体液免疫和细胞免疫）、免疫力持久等优点。 减毒活疫苗 灭活疫苗 灭活疫苗又称死疫苗，是由完整病毒组成，即用灭活剂处理活的病毒，使其致病性丧失或减弱，但是仍然保持病毒的全部或部分免疫原性。 灭活疫苗和减毒活疫苗的差别在于疫苗中的病毒不具有感染性，在体内不能够增殖。 亚单位疫苗 亚单位疫苗 ：分离提取病原体中具有免疫力的蛋白，或利用DNA重组技术是重组体表达这类蛋白、多肽，或合成肽制成的疫苗，这类疫苗不是完整的病毒是病毒的一部分物质。 亚单位疫苗的特点和灭活疫苗类似，主要差别是病毒亚单位的体积较小，免疫原性差，有些甚至是半抗原，需要和蛋白质载体偶联后使用。 新型疫苗： 基因缺失活疫苗 基因工程载体疫苗 基因工程亚单位疫苗 病毒样颗粒 蛋白质工程苗 合成肽疫苗 遗传重组疫苗 核酸疫苗（目前研究的热点） 常用病毒类疫苗： 用细胞培养技术制备的疫苗。 早期的病毒疫苗如痘苗和至今使用的黄热疫苗等为粗制疫苗，其有效成分如病毒粒子或抗原亚单位成分未经提纯。 早期粗制疫苗：狂犬病疫苗、家肝疫苗、乙型脑炎疫苗、脊髓灰质炎疫苗、流行性出血热疫苗和流行性感冒疫苗等 缺点：来源于动物组织、细胞、和培养液的蛋白质等杂质成分，容易使接种者产生过敏等不良反应 通过采用纯化技术对疫苗的免疫活性成分如全病毒或病毒中具有免疫保护作用的验单位成分进行纯化加工、取出部分或大部分生物源性杂质成分，如动物组织，细胞基质和培养基中的杂蛋白、糖类、脂类及核酸等，浓缩富集了有保护或辅助治疗作用的抗原成分，避免或减低了疫苗接种后的不良反应发生率，使得纯化病毒比传统粗制疫苗更加安全！ 目前纯化病毒性疫苗主要有3类： Ⅰ 纯化的全病毒颗粒或不含核酸的病毒样颗粒（VLP)制成的疫苗 如：狂犬病疫苗 Ⅱ 将病毒颗粒裂解后制备的纯化裂解疫苗 如：裂解流感疫苗 Ⅲ 用具保护作用的病毒成分制成的亚单位疫苗 如：乙型肝炎疫苗（由乙型肝炎表面抗原制造而成） 目前纯化病毒疫苗的生产工艺基本流程的几个阶段： 病毒或抗原的成分收获液 分离纯化有效成分 配置分装成品 病毒性疫苗的生产工艺流程 人二倍体细胞 原代细胞制备 单层细胞 病毒接种 细胞洗涤、换液 病毒释放及保存 病毒灭活 病毒收获 半成品制备 病毒原液合并、澄清 分装或冻干 病毒原液合并、澄清 半成品制备 分装或冻干 成品鉴定 成品鉴定 灭活类疫苗 减毒类疫苗 重组酵母乙型肝炎疫苗的生产工艺 酵母生产的HBsAg在细胞中一颗粒形式存在，其中的亚单位通过非共价键不紧密的结合在一起。在细胞外它转变成第二种形式，即单个多肽通过二硫键结合成二聚体，最后二聚体之间形成二硫键，得到二硫键交联的颗粒。 国内重组酿酒酵母乙型肝炎疫苗的生产菌株为2150-2-3株，该株含编码HBsAg的质粒。经过传统的三级发酵后，通过过滤或离心是酵母细胞与发酵液分离，然后细胞通过高压匀浆器破碎释放HBsAg。粗裂解物用0.2um中空纤维柱微滤除去细胞碎片等大颗粒杂质，再经超滤出去小分子杂质。用硅胶吸附HBsAg，再用热硼酸缓冲液洗脱得HBsAg粗品。用疏水层析进步纯化HBsAg，用硫氰酸盐处理以完成二硫键的交联。处理后的HBsAg再经稀释和除菌过滤。加入甲醛，37℃保温一段时间后用佐剂Al(OH)3吸附，加入防腐剂后即可为疫苗原液。 ＋ 37℃保温一段时间，氢氧化铝吸附 ＋ 酿酒酵母2150-2-3菌株 纯化HBsAg HBsAg粗品 蛋白酶抑制剂 HBsAg 过滤或离心 酵母细胞 传统三级发酵 发酵液 除杂HBsAg 高压均浆器 0.2um中空纤维柱 硅胶吸附，热硼酸缓冲液洗脱 疏水层析 硫氰盐 HBsAg 甲醛 ＋ 疫苗原液 HBsAg 防腐剂 处理回收 *