免疫层析诊断技术(胶体金技术).pptVIP

Tel:021Tom Bacon, Gene Co.,LTD. Tom Bacon, Gene Co.,LTD Lateral-Flow Diagnostic Technology免疫层析快速诊断技术 ------Tom Bacon (PM-BIODOT), GENE(SH Office) Introduce简 介 胶体金技术起源及现状 起源:1971年,Faulk 和Taytor引入 现状: 1.层析法(Lateral-Flow) 2.渗滤法(Through) 3.免疫金电镜 胶体金的作用: 指示剂 层析法技术优势:简单\现场\快速 与常规诊断方法相比： 技术应用 Elements原理 检测原理视频演示 免疫层析法检测原理分类介绍（双抗体夹心） 免疫层析法检测原理分类介绍（竞争反应） 免疫层析法检测原理分类介绍（应用proteinA金标） TECHNOLOGY技术 技术分项 抗原抗体生物原料 标记技术 NC膜与溶液喷点 胶体金垫与溶液喷点 样品垫 吸水纸 粘性底板 干燥方法 溶液体系分析 装配\切条\包装 抗体 Antibody 来源差异: 鼠抗,兔抗和羊抗 种类差异: 单抗,多抗 腹水的处理: 饱和硫酸铵沉淀法 特异性:亲和层析柱 浓度: 浓缩 溶解液:不含盐,例如PB 标记技术 Conjugate 容器硅化处理 金颗粒制备 (负电) 颜色与颗粒的关系. 最佳标记颗粒大小40nm. 蛋白质最适用量测定:盐析法 NC膜与溶液喷点---NC膜 NC膜的性能 NC膜的选择 爬速(???秒/4cm)对灵敏度的影响 底衬的作用 不同膜厂家的产品差异(Whatman/SS,Millipore,Sartorius) NC膜与溶液喷点---喷点溶液 Dispensing(喷点演示:BIODOT XYZ系列喷点仪器) C\T线溶液前处理: 1.过滤,0.2um孔径滤膜 2.离心1万转10分钟 喷点过程 头尾去除,喷点中的报废标志 C\T线喷点工艺(BJQ3000喷头)与接触划点(FL1000XY喷头)工艺比较 胶体金垫与溶液喷点 胶体金垫 1.材料选择 2.糖的作用 3.缓冲溶液的作用 喷点法与浸泡法的比较(AJQ3000喷头) 样品垫 材料选择 各成分的作用 1.缓冲溶液的作用 (PH) 2.盐的作用 3.大分子蛋白BSA\PVP 4.表面活性剂 Tween-20,TritonX-100 吸水纸 吸水效率 进口与国产纸的差异 粘性底板 干燥方法 Dry 干燥方法的比较 1.冷冻干燥法 2. 烘箱 3.烘房 温湿度的控制 1.温度对蛋白的影响 2.湿度的控制办法 溶液体系分析 各环节缓冲溶液的选择与统一 盐的作用 表面活性剂的作用 糖的作用 大分子蛋白的作用 其他作用物质 装配\切条\包装Lamination 装配 切条 (演示:BIODOT CM4000切条机) 刀的维护与清洁 底板选择(胶的影响) 包装 常见技术问题解决方案 Troubleshooting 解决问题的办法 批号记录 替换分析 原料效价降低 保存办法 反复复融的影响 细胞株的退化 标记问题 兔抗标记 标抗原 盐 标记沉淀—保护剂\金颗粒 层析问题 标记复合物的颗粒沉积 活性剂 糖的作用 灵敏度问题 源头:抗原抗体免疫反应 材料问题—NC膜 附加物质的解决办法 假阳性的解决 批内\批间差 长期保存 试纸失活 加速稳定实验的设计与操作 实验研究的时间安排 上游 抗原抗体的制备 中游 材料选择比较 (包括上游产品和其他原料) 下游 成品调试 工作接口的设计 Deadline的制定 关键步骤: 原料效价\标记\选膜\点样\调试 学术论文的构成 一般情况 综述 抗体制备 实验材料的选择 化学物质的组合调试 与其他方法检测结果比较 建议 对标记技术的探索 结果检测方式的探索 Manufacture生 产 研发到生产的连接问题 实验室工艺到生产的转化要点 人 生产瓶颈:装条\包装 技术人员架构 机—仪器设备 层析柱 离心机,磁力搅拌器,移液枪,加热仪器 BIODOT喷点\切条仪器 封口\大包 料 来源\批检 SOP操作 批号制度 工作环境 生产区的建设人流,物流 功能房间的构成 配液\喷点\干燥\贴膜\切条\包装 清洁度,湿度温度控制 Developing发展方向 标记技术的探索 顺磁粒子标记、量子点标记 免疫反应信号转化为电子信号模式 新的层析模式 生物传感器 Thanks! Contact with me: Tom Bacon (杨斌) Tel: 021Fax:021Mobil